志賀氏菌顯色培養(yǎng)基的顯色原理與使用方法及操作流程！
小楊 / 2025-10-17 09:16:53
志賀氏菌顯色培養(yǎng)基是通過特異性酶解反應(yīng)顯色來鑒別志賀氏菌，使用時(shí)需嚴(yán)格遵循無菌操作和培養(yǎng)流程。
一、顯色原理
添加特異性底物：培養(yǎng)基中加入了志賀氏菌專屬的酶底物（如特定 β- 葡萄糖苷酶底物），該底物與顯色基團(tuán)（如硝基酚類）結(jié)合，本身不顯色。
酶解反應(yīng)顯色：
志賀氏菌能產(chǎn)生特定酶，可分解培養(yǎng)基中的對應(yīng)底物，釋放出顯色基團(tuán)，使菌落呈現(xiàn)特定顏色（多為紅色、紫色或玫瑰色）。
抑制雜菌干擾：培養(yǎng)基中還添加了抑菌劑（如煌綠、膽鹽），能抑制
大腸桿菌、
沙門氏菌等常見腸道雜菌生長，或讓雜菌呈現(xiàn)與志賀氏菌不同的顏色（如
大腸桿菌呈藍(lán)色、無色），減少誤判。
二、使用方法（通用流程）
使用需遵循“準(zhǔn)備 - 接種 - 培養(yǎng) - 觀察”四步，關(guān)鍵在于無菌操作和控制培養(yǎng)條件：
1、培養(yǎng)基準(zhǔn)備
取干粉培養(yǎng)基，按說明書比例（如 1 升水加 35 克干粉）加入蒸餾水或純化水，攪拌至完全溶解。
分裝到錐形瓶或培養(yǎng)皿中，121℃高壓蒸汽滅菌 15-20 分鐘，滅菌后冷卻至 45-50℃（手摸瓶壁不燙），避免溫度過高破壞顯色物質(zhì)。
2、樣品接種
無菌操作下，取待檢樣品（如糞便懸液、食品勻漿）0.1-0.2 毫升，滴加在冷卻后的培養(yǎng)基表面。
用無菌涂布棒將樣品均勻涂滿培養(yǎng)基表面，避免涂液堆積（防止菌落融合）。
3、培養(yǎng)條件
將接種好的培養(yǎng)皿倒置（防止冷凝水滴落污染菌落），放入 36±1℃的恒溫培養(yǎng)箱，需厭氧或微氧環(huán)境（部分培養(yǎng)基需添加厭氧產(chǎn)氣包），培養(yǎng) 18-24 小時(shí)。
4、結(jié)果觀察與確認(rèn)
初步判斷：觀察菌落顏色，挑取符合志賀氏菌特征的菌落（如紅色、直徑 1-2 毫米、邊緣整齊的菌落）。
進(jìn)一步確認(rèn)：顯色僅為初步篩選，需將可疑菌落接種到生化鑒定管或用 PCR、血清學(xué)試驗(yàn)驗(yàn)證，避免假陽性。
三、注意事項(xiàng)
抑菌劑對志賀氏菌也有輕微抑制，需嚴(yán)格控制培養(yǎng)時(shí)間，不足 18 小時(shí)可能不顯色，超過 24 小時(shí)菌落易老化變形。
樣品接種后需盡快培養(yǎng)，避免培養(yǎng)基干燥；若培養(yǎng)基滅菌后出現(xiàn)沉淀或變色，不可使用。
操作全程需無菌，防止環(huán)境雜菌污染，影響結(jié)果準(zhǔn)確性。
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