實驗中用菌落計數(shù)器檢測空氣中細(xì)菌的操作方法與注意事項！
小楊 / 2025-10-21 09:46:54
百歐博偉生物：使用菌落計數(shù)器檢測空氣中細(xì)菌，核心是先通過采樣方法捕獲空氣中的細(xì)菌并接種到培養(yǎng)基上，經(jīng)培養(yǎng)后形成菌落，再用菌落計數(shù)器計數(shù)，最終換算出空氣中的細(xì)菌濃度。以下是詳細(xì)的操作方法及相關(guān)注意事項：
一、實驗準(zhǔn)備
1、儀器與器材
核心儀器：菌落計數(shù)器（可選擇手動計數(shù)型或自動計數(shù)型，自動型需提前校準(zhǔn)）。
采樣儀器：空氣采樣器（常用撞擊式采樣器，如安德森采樣器；或沉降式采樣皿架）。
其他器材：無菌培養(yǎng)皿、營養(yǎng)培養(yǎng)基（如 LB 培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，適用于大多數(shù)異養(yǎng)細(xì)菌）、高壓蒸汽滅菌鍋、恒溫培養(yǎng)箱、無菌操作臺、酒精燈、移液管等。
2、試劑與培養(yǎng)基制備
按培養(yǎng)基配方配置營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，加熱溶解后分裝至無菌培養(yǎng)皿中，每皿約 15-20mL，平放冷卻凝固，制成平板備用（需保證培養(yǎng)基無菌，凝固后無氣泡、無污染）。
3、實驗環(huán)境預(yù)處理
采樣前需確認(rèn)采樣環(huán)境的溫濕度、通風(fēng)狀態(tài)等，記錄環(huán)境條件。
實驗操作全程在無菌條件下進行，避免人為污染。
二、空氣細(xì)菌采樣
常用兩種采樣方法，可根據(jù)實驗需求選擇：
1、撞擊式采樣法（精準(zhǔn)度較高）
組裝空氣采樣器，將無菌營養(yǎng)瓊脂平板放入采樣器的相應(yīng)位置。
設(shè)定采樣參數(shù)：根據(jù)環(huán)境細(xì)菌濃度調(diào)整采樣流量（通常為 28.3L/min 或 100L/min）和采樣時間（一般 5-30 分鐘，細(xì)菌濃度高則縮短時間，避免菌落重疊）。
啟動采樣器，空氣通過采樣器時，細(xì)菌被撞擊到培養(yǎng)基表面，完成采樣。采樣后迅速蓋好培養(yǎng)皿蓋子，做好標(biāo)記（采樣時間、地點、條件等）。
2、沉降式采樣法（操作簡便，適用于粗略檢測）
根據(jù)采樣面積確定培養(yǎng)皿數(shù)量（通常每 10-15m² 放置 1 個平板），將無菌營養(yǎng)瓊脂平板在采樣點水平放置，打開皿蓋，暴露于空氣中一定時間（一般 5-30 分鐘，暴露時間需記錄準(zhǔn)確）。
暴露結(jié)束后，立即蓋好皿蓋，做好標(biāo)記。
三、培養(yǎng)過程
將采樣后的培養(yǎng)皿倒置放入恒溫培養(yǎng)箱中（避免冷凝水滴落污染菌落），設(shè)定培養(yǎng)條件：溫度 37℃，培養(yǎng)時間 48 小時（適用于大多數(shù)嗜溫細(xì)菌）。
培養(yǎng)期間定期觀察，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基污染（如出現(xiàn)異常顏色、形態(tài)的菌落），需及時剔除該樣本。
四、菌落計數(shù)（核心步驟）
1、計數(shù)前準(zhǔn)備
培養(yǎng)結(jié)束后，取出培養(yǎng)皿，先肉眼觀察菌落形態(tài)，區(qū)分有效菌落（目標(biāo)細(xì)菌菌落）與污染菌落。
若使用自動菌落計數(shù)器，需提前開啟儀器預(yù)熱，調(diào)整亮度、對比度等參數(shù)，確保菌落圖像清晰；手動計數(shù)型需準(zhǔn)備計數(shù)筆、放大鏡等輔助工具。
2、計數(shù)操作
自動菌落計數(shù)器法：將培養(yǎng)皿放置在計數(shù)器的載物臺上，儀器通過圖像識別技術(shù)自動識別并計數(shù)菌落數(shù)量。對于重疊菌落，部分儀器可手動修正，或根據(jù)儀器提示調(diào)整參數(shù)后重新計數(shù)，記錄計數(shù)結(jié)果。
手動計數(shù)法：將培養(yǎng)皿放在菌落計數(shù)器的發(fā)光載物臺上，借助放大鏡觀察，用計數(shù)筆標(biāo)記已計數(shù)的菌落，遵循“計上不計下、計左不計右”的原則，避免重復(fù)或遺漏，同時記錄菌落數(shù)量。
3、計數(shù)注意事項
選擇菌落數(shù)在 30-300 之間的培養(yǎng)皿進行計數(shù)，此范圍的計數(shù)結(jié)果更準(zhǔn)確；若菌落數(shù)過多（超過 300），需稀釋后重新采樣培養(yǎng)；若過少（少于 30），可延長采樣時間或增加采樣量。
對于形態(tài)相似但可能不同種的菌落，若僅需總細(xì)菌數(shù)，可統(tǒng)一計數(shù)；若需區(qū)分菌種，需結(jié)合菌落形態(tài)、染色法等進一步鑒定。
五、濃度換算
根據(jù)采樣方法的不同，采用對應(yīng)的公式換算空氣中的細(xì)菌濃度（單位：CFU/m³，菌落形成單位 / 立方米）：
撞擊式采樣法：細(xì)菌濃度（CFU/m³）= 培養(yǎng)皿上的菌落數(shù) × 稀釋倍數(shù) / 采樣體積（m³）。其中，采樣體積（m³）= 采樣流量（L/min）× 采樣時間（min）/ 1000。
沉降式采樣法：常用奧梅梁斯基公式估算，細(xì)菌濃度（CFU/m³）= 50000 × 培養(yǎng)皿上的菌落數(shù) /（培養(yǎng)皿面積（cm²）× 暴露時間（min））。該方法為粗略估算，結(jié)果誤差相對較大。
六、質(zhì)量控制與注意事項
無菌控制：所有與細(xì)菌接觸的器材、培養(yǎng)基均需徹底滅菌；采樣及培養(yǎng)過程中嚴(yán)格遵循無菌操作規(guī)范，設(shè)置空白對照（未采樣的無菌培養(yǎng)基平板同步培養(yǎng)），若空白對照出現(xiàn)菌落，說明實驗存在污染，結(jié)果無效。
儀器校準(zhǔn)：定期校準(zhǔn)空氣采樣器的流量和菌落計數(shù)器的計數(shù)精度，確保數(shù)據(jù)準(zhǔn)確。
平行實驗：同一采樣點至少設(shè)置 3 個平行樣本，取菌落數(shù)的平均值進行濃度換算，減少實驗誤差。
安全防護：實驗過程中避免直接接觸細(xì)菌樣本，操作結(jié)束后對實驗器材、廢棄物進行滅菌處理，防止生物污染。
北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司的
微生物菌種查詢網(wǎng)提供微生物菌種保藏、測序、購買等服務(wù),是中國微生物菌種保藏中心的服務(wù)平臺，并且是集微生物菌種、菌種,ATCC菌種、細(xì)胞、培養(yǎng)基為一體的大型微生物查詢類網(wǎng)站，自設(shè)設(shè)備及技術(shù)的微生物菌種保藏中心！歡迎廣大客戶來詢！
下載附件
上一篇：如何提高菌種缺陷短波單胞菌檢測的準(zhǔn)確性和靈敏度？
下一篇：微生物倒平板操作要點與避坑指南：告別氣泡、開裂、污染！