常用細(xì)胞系配置培養(yǎng)基
中國微生物菌種查詢網(wǎng) / 2016-06-06 11:40:18
我們單位細(xì)胞庫建議使用背景資料上指定的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞系，部分常用的培養(yǎng)基配制方法羅列如下，培養(yǎng)基過濾除菌后應(yīng)檢測無菌狀況，然后補加血清和雙抗，雙抗的使用濃度一般是終濃度100單位/mL培養(yǎng)基。當(dāng)然，部分細(xì)胞可用其它培養(yǎng)基替代，每個實驗室都有自己傳統(tǒng)的培養(yǎng)基配制方法，我們提供的配制方法僅供參考。
1.消化液的配制：
①胰酶（1：250） 2.5 克
②EDTA-Na 0.3克
③NaCl 8.0克
④KCl 0.4克
⑤Glucose 1.0克
⑥Phenol Red 0.005克
⑦Water 1000 mL
磁力攪拌2-3小時，調(diào)pH 7.8-8.0，過濾除菌。
2．MEM medium (1L)
① MEM 1瓶（代）
Non-essential amino acids 10 mL
丙酮酸鈉 0.11克
water 800 mL
磁力攪拌2-3小時
② NaHCO3 2.0克
water 200 mL
磁力攪拌1小時
①+②, 調(diào)pH 7.0-7.2，過濾除菌。
3. RPMI 1640 medium (1L)
① RPMI 1640 1瓶（代）
L-Glutamine 0.11克
丙酮酸鈉 0.11克
water 800 mL
磁力攪拌2-3小時
② NaHCO3 2.0克
water 200 mL
磁力攪拌1小時
①+②, 調(diào)pH 7.0-7.2，過濾除菌。
4. DMEM medium (1L)
① DMEM 1瓶（代）
Glucose 3.5克
water 800 mL
磁力攪拌2-3小時
② NaHCO3 2.0克
water 200 mL
磁力攪拌1小時
①+②, 調(diào)pH 7.0-7.2，過濾除菌。
5. Grace`s Medium
Grace`s Insect Cell Culture Medium 1瓶（代）
Yeast extract 3.3克
Lactal albumen hydrolysate 3.3克
NaHCO3 0.35克
water 1000 mL
在15-30℃磁力攪拌4-5小時
用2N KOH 調(diào)pH至6.5-6.6，過濾除菌。
6．DMEM/F12 Medium
① DMEM/F12 1瓶（代）
L-Glutamine 0.2克
丙酮酸鈉 0.11克
water 800 mL
磁力攪拌2-3小時
② NaHCO3 2.0克
water 200 mL
磁力攪拌1小時
①+②, 調(diào)pH 7.0-7.2，過濾除菌。
7. 部分常用的微生物檢測培養(yǎng)基
7.1 Sabouraud dexrosebroth (Difco 0382-01) SDB
Sabouraud powder 3.00g
Distilled water 100ml pH 5.6
Dispense 3ml aliquots of broth into each of 33 test tubes (12×100mm), and cap each tube loosely.
7.2 Brain heart infusion broth BHI (Difco 0037-01-6)
Broain heart infusion powder 3.70g
Distilled water 100ml pH 7.4
Dispense 33 test tubes (12×100mm), and cap each tube loosely.
7.3 Thioglycollate medium THIO (Difco 0256-01)
Thioglycollate powder 2.98g
Distilled water 100ml pH 7.1
Dispense 33 test tubes (12×100mm), and cap each tube loosely.
7.4 Trypticase soy broth TSB (BBL 01-162)
Trypticase soy broth powder 3.00 g
Distilled water 100ml pH 7.3
Dispense 33 test tubes (12×100mm), and cap each tube loosely.
All medium are sterilized in an autoclave for 20 min at 15 lbc pressure (121℃) on slow exhaust. Store at room temperature or 4℃
8,包被用多聚賴氨酸配制
取25mg溶于50ml H2O中，過濾除菌，再取4ml 稀釋至50ml H2O中 成工作液，4度保存。
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