細(xì)胞系包裹收到后，請(qǐng)按下列方法操作。
①培養(yǎng)基：complete growth medium: RPMI 1640, 90%; fetal bovine serum, 10% ,Temperature: 37.0C
②。如果接種小鼠腹腔，細(xì)胞濃度大于2-5 X 107
③瓶?jī)?nèi)含5%FBS，請(qǐng)補(bǔ)加至10%FBS
一．貼壁細(xì)胞
1．嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
2．將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)50ml培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無(wú)菌容器中（此培養(yǎng)基可再用）。
3．加入消化液1～1.5ml，37℃消化直到細(xì)胞脫落。
4．換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，加入步驟2的培養(yǎng)基8ml，再在37℃，5％CO2下培養(yǎng)。
二．懸浮細(xì)胞
1．嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
2．將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)50ml培養(yǎng)基用吸管移到離心管中。（嚴(yán)禁直接傾倒）
3．在1000rpm，10min離心。
4．將上清吸到另一無(wú)菌容器中，（此培養(yǎng)基可再用）。
5．對(duì)沉淀用步驟4的培養(yǎng)基再懸浮。
6．換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，加入細(xì)胞培養(yǎng)瓶，在37℃，5％CO2下培養(yǎng)。
三．半貼壁細(xì)胞
1．參照上述1、2操作。
四．二毫升小管操作方法 小管內(nèi)也是此細(xì)胞。
1．此管內(nèi)細(xì)胞濃度在1-5 X 105個(gè)，將24孔克隆板的一排6孔每孔內(nèi)加1毫升培養(yǎng)基；
2．將小管無(wú)菌開(kāi)啟，細(xì)胞吸入第1孔內(nèi)，倍比稀釋至2孔，再倍比稀釋至3孔，最后至6孔；
3．在37℃，5％CO2下培養(yǎng)，1周內(nèi)應(yīng)有某孔至細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，取出細(xì)胞至T-25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，常規(guī)培養(yǎng)。
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