己酸菌是濃香型白酒生產(chǎn)中非常重要的產(chǎn)酸微生物，由它代謝產(chǎn)生的己酸與大曲發(fā)酵產(chǎn)生的酒精生成己酸乙酯，是濃香型大曲酒的主體香成分。己酸菌培養(yǎng)液可廣泛應(yīng)用于濃香型大曲酒的灌窖、窖池保養(yǎng)、人工窖泥培養(yǎng)、酯化液的制作等，以改善和提高濃香型大曲酒的質(zhì)量。
一、菌種簡(jiǎn)介
平臺(tái)編號(hào)：Bio-115385
規(guī)格：凍干物
拉丁屬名：Caproicibacterium Amylolyticum
中文名稱：己酸菌屬
拉丁名稱：Caproicibacterium amylolyticum
來(lái)源歷史：江南大學(xué)
收藏時(shí)間：2020-09-16 00:00:00.0
原始編號(hào)：LBM18003
原產(chǎn)國(guó)：中國(guó)
模式菌株：是
生物安全級(jí)別：一級(jí)
其它保藏中心編號(hào)：JCM 33783
培養(yǎng)基編號(hào)：177
培養(yǎng)溫度：37℃
培養(yǎng)時(shí)間：24-48h
需氧類型：專性厭氧
分離基物：發(fā)酵污泥
采集地：中國(guó)
保存方法：冷凍干燥管保藏
用途：研究
注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫(kù)為準(zhǔn)）
二、培養(yǎng)基
培養(yǎng)基： 1268 CAPROICIBACTERIUM MEDIUM(見(jiàn)附件)
三、純化
由于己酸菌為能生成芽孢的梭狀芽孢桿菌,己酸菌孢子有耐熱性,而其營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞是不耐熱的,可采用熱處理法淘汰較弱的芽孢,并同時(shí)殺滅營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞和其它雜菌,使己酸菌株得以純化。因此,可將分離培養(yǎng)7d后的己酸菌液在85℃恒溫處理10min,冷卻后再接入新的培養(yǎng)液中培養(yǎng),以達(dá)到純化己酸菌的目的。
四、產(chǎn)酸鑒定
對(duì)分離純化后的菌種要進(jìn)行顯微鏡觀察及發(fā)酵產(chǎn)物的定量檢測(cè),以鑒別是否屬于己酸菌。通過(guò)多次分離、純化、檢測(cè),從中選取菌體健壯、活躍,并且芽孢桿菌占優(yōu)勢(shì)、產(chǎn)己酸高的優(yōu)質(zhì)菌,作為實(shí)驗(yàn)菌種。
五、培養(yǎng)
1、接種培養(yǎng)
將不加瓊脂的分離培養(yǎng)基于0.1Mpa高壓滅菌20min,冷卻后加入碳酸鈣和乙醇,按15%接種量加入己酸菌種子液。為保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確可靠,平行培養(yǎng)12個(gè)250mL的小三角瓶和一個(gè)2000mL的大三角瓶,同時(shí)置34℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12d。
2、取樣方法
對(duì)培養(yǎng)的己酸菌液每天觀察產(chǎn)氣變化,并進(jìn)行取樣分析。取樣方法為每天取一個(gè)小三角瓶的培養(yǎng)液分析,間隔兩天再?gòu)拇笕瞧恐腥?0mL樣品分析比較,以糾正偶然性因素所帶來(lái)的分析偏差。
六、保藏條件
培養(yǎng)物和凍干菌種應(yīng)在 2-8°C 保存，請(qǐng)勿長(zhǎng)期置于室溫；
七、注意事項(xiàng)
1）凍干首次活化，干粉要全部用完，不能預(yù)留，用無(wú)菌吸管吸取 0.3ml 的培養(yǎng)液（即以上建議的培養(yǎng)基配方，不加瓊脂）或者無(wú)菌水，滴入凍干管中，輕輕振蕩至其溶解。吸取全部菌懸液，接種在培養(yǎng)基上（建議不超過(guò) 2 支平板，操作完畢后盡快置于厭氧環(huán)境下恒溫培養(yǎng)；若需接種液體培養(yǎng)基，制作培養(yǎng)液時(shí)，應(yīng)使用厭氧螺口試管，并利用高純氮?dú)馊コ嚬芎团囵B(yǎng)液中的氧氣）； 經(jīng)過(guò)冷凍干燥保藏，菌種處于休眠狀態(tài)，復(fù)蘇培養(yǎng)時(shí)可能會(huì)延遲生長(zhǎng)，這時(shí)需較長(zhǎng)的培養(yǎng)時(shí)間； 若您收到的是已復(fù)蘇的培養(yǎng)物（非凍干菌），則可以直接用于您的實(shí)驗(yàn)，或根據(jù)需要轉(zhuǎn)接培養(yǎng)；如有不明白之處，請(qǐng)務(wù)必先咨詢我單位技術(shù)人員，避免不必要的損失；
2）微生物菌種應(yīng)保藏于低溫、清潔干燥的地方，室溫放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致菌種衰退；
3）菌種操作應(yīng)在無(wú)菌條件下進(jìn)行；轉(zhuǎn)種完畢，應(yīng)經(jīng)滅菌再做丟棄處理；
4）應(yīng)根據(jù)菌種狀況及時(shí)轉(zhuǎn)接，凍干菌種保藏時(shí)間通常為 2-25 年；
5）菌種使用過(guò)程中如出現(xiàn)雜菌污染或菌種生產(chǎn)性能下降，應(yīng)及時(shí)和微生物菌種查詢網(wǎng)聯(lián)系。
6）如若有菌種復(fù)蘇不活或者污染等情況，請(qǐng)?jiān)谑盏胶?2 個(gè)月內(nèi)聯(lián)系，逾期不予受理；
7）打管操作需由專業(yè)微生物技術(shù)人員在相應(yīng)的防護(hù)設(shè)備中進(jìn)行，生物危害程度為三類的菌種應(yīng)在生物安全柜中操作，打管時(shí)凍干管應(yīng)遠(yuǎn)離面部，保護(hù)眼睛。
8）西林瓶開(kāi)封：用 75%酒精棉擦拭西林瓶外部，在安全柜內(nèi)使用尖嘴鉗去除塑料蓋及鋁蓋，注意不要同時(shí)打開(kāi)膠塞。緩慢開(kāi)啟膠塞，用 75%酒精棉消毒瓶口部分，使用無(wú)菌吸管注入0.5ml 適宜的液體培養(yǎng)基復(fù)溶凍干粉末。
9）安瓿瓶開(kāi)封：用浸過(guò) 75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量（2-3滴）無(wú)菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端并將凍干管開(kāi)口處在火焰上過(guò)一遍，并保持在火焰旁操作。
10）甘油管使用：使用本甘油菌時(shí)可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或進(jìn)行液體培養(yǎng)即可。也可以完全融解后使用，但隨著凍融次數(shù)的增加，細(xì)菌的活力會(huì)逐漸下降。
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