細胞簡介
人結(jié)腸腺癌肺轉(zhuǎn)移細胞是從一位72歲男性結(jié)腸癌患者的肺轉(zhuǎn)移灶建立的可移植人類癌細胞株；腫瘤組織皮下接種于BALB/c裸鼠，并連續(xù)進行移植。在裸鼠身上的移植過程中，細胞株始終保持結(jié)腸癌的原始組織性狀。
產(chǎn)品信息
平臺編號：Bio-73170
規(guī)格：1×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
細胞信息：T84
細胞名稱：T84（人結(jié)腸腺癌肺轉(zhuǎn)移細胞）
種屬：人
年齡（性別）：男
組織來源：器官：結(jié)腸；
疾?。航Y(jié)直腸癌；
取材轉(zhuǎn)移灶：肺
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
背景描述：T84細胞是從一位72歲男性結(jié)腸癌患者的肺轉(zhuǎn)移灶建立的可移植人類癌細胞株；腫瘤組織皮下接種于BALB/c裸鼠，并連續(xù)進行移植。在裸鼠身上的移植過程中，細胞株始終保持結(jié)腸癌的原始組織性狀。在無胸腺小鼠中傳代23代后建立了T84細胞。T84細胞單層生長到飽和并在接觸細胞間展現(xiàn)出緊密連接和橋粒，有很多關(guān)于多肽類激素和神經(jīng)遞質(zhì)并維持定向電解質(zhì)傳輸?shù)氖荏w。T84細胞展現(xiàn)了接觸細胞中的緊密連接和橋粒，角蛋白免疫過氧化物酶染色陽性。
生長培養(yǎng)基：DMEM/F12＋5% FBS＋1% P/S
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃
用途：(STR鑒定正確)
注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準）
T84人結(jié)腸腺癌肺轉(zhuǎn)移細胞收到后處理
細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細胞運輸?shù)淖詈棉k法。收到細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi)，嚴格無菌操作，培養(yǎng)箱靜置2-4小時。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，加入6ml完全培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基）
T84人結(jié)腸腺癌肺轉(zhuǎn)移細胞培養(yǎng)步驟
一、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
二、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
a）、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
b）、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi)，嚴格無菌操作；將小管細胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右完全培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。
三、細胞凍存：（注：無血清凍存液凍存細胞的方法請參考我司官網(wǎng)貨號：C7001）
1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3、用適量的凍存液重懸細胞，并放置于凍存管中；
4、先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃
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