變異庫克菌是克氏庫克菌屬于微球菌屬?？耸蠋炜司侵胁怀Ｒ姷闹虏〖?xì)菌，主要在皮膚還有口腔的地方存在，庫克菌是Kocuria屬的微生物原產(chǎn)地為中國。主要用于研究。
一、菌種簡介
平臺編號：Bio-59447
提供形式：凍干物
拉丁屬名：Kocuria Varians
中文名稱：變異庫克菌
屬名：Kocuria
種名加詞：varians
來源歷史：←天津科技大學(xué)(21006)
收藏時間：2007.2.9
資源歸類編碼：15131518102
模式菌株：非模式菌株
主要用途：研究
生物危害程度：四類
致病對象：無
培養(yǎng)基：可溶性淀粉 20.0g，KNO3 1.0g，K2HPO4 0.5g，MgSO4·7H2O 0.5g，NaCl 0.5g，F(xiàn)eSO4·7H2O 0.01g，瓊脂 15.0g， 蒸餾水 1.0L，pH7.2～7.4。0.06kg/cm2滅菌30min。
培養(yǎng)溫度：37℃
資源保藏類型：培養(yǎng)物
保存方法：-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法
實物狀態(tài)：有實物
共享方式：公益性共享；資源純交易性共享；合作研究共享；資源交換性共享
源數(shù)據(jù)主鍵：21123
用途：研究；
注意事項：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準(zhǔn)）
二、微生物培養(yǎng)方法
1、平板劃線分離法:把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細(xì)胞用接種環(huán)圈在平板培養(yǎng)基表面,通過分區(qū)劃線稀釋而得到較多獨立分布的單個細(xì)胞,經(jīng)培養(yǎng)后生長繁殖成單菌落。
2、稀釋涂布平板法將菌液進行一系列的梯度稀釋,然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進行培養(yǎng),在稀釋度足夠高的菌液里,聚集在一起的微生物將被分散成單個細(xì)胞,從而能在培養(yǎng)基表面形成單個菌落。
上述兩種方法雖然都可以實現(xiàn)觀察菌落特征的目的,但平板劃線分離法不能對菌落計數(shù),而稀釋涂布平板法培養(yǎng)過程復(fù)雜,對平板的要求比較高,可參照以下步驟:
a、制備平板培養(yǎng)基將氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基加熱溶化并冷卻至65℃,向氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基中加入克林霉素溶液3~5ml并混合均勻,然后取20ml混合均勻的培養(yǎng)基溶液倒入培養(yǎng)皿,輕輕搖動培養(yǎng)皿,使培養(yǎng)基溶液均勻分布在培養(yǎng)皿底部,待培養(yǎng)基溶液凝固后即得平板培養(yǎng)基。
b、制備活性污泥混合液稱取活性污泥土樣15g,放入盛100ml無菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶中,振搖15~20min混合均勻,用一支1ml無菌吸管從中吸取1ml土壤懸液加入盛有9ml無菌水的大試管中充分混勻,制成活性污泥混合液。
c、培養(yǎng)基涂布從活性污泥混合液中吸取0.2ml,滴在平板培養(yǎng)基表面的中央位置,用無菌玻璃涂棒將活性污泥混合液沿同心圓方向輕輕地向外擴展,使之分布均勻。
三、操作流程
菌株復(fù)蘇:(按三區(qū)劃線法將留菌管內(nèi)的原始菌株進行復(fù)蘇)
1)所有菌株,顯色培養(yǎng)基分4區(qū),每區(qū)一株,標(biāo)明菌株號、菌種名常用縮寫如下:
cal: 白念珠菌 cgl:光滑念珠菌 cpa: 近平滑念珠菌 ctr: 熱帶念珠菌 ckr: 克柔念珠菌 cne: 新型隱球菌,其他菌種標(biāo)記全名
2)隱球菌除傳顯色培養(yǎng)基以外,另傳1/2塊血平皿上述菌株統(tǒng)一37oC孵育48h
菌種鑒定:(48h后觀察結(jié)果)
四、菌種的純化與復(fù)壯
變異庫克菌在傳代保藏過程中,易發(fā)生衰退、變異、污染、死亡,因此必須定期檢查，將菌種接種至液體培養(yǎng)基內(nèi)使之復(fù)活,重新分離,純化開成單個菌落,再作菌種檢定,包括菌落形態(tài)、顏色,染色性、鏡下觀察菌體形態(tài)等,必要時可做生化試驗及血清學(xué)反應(yīng)。
菌種經(jīng)人工傳代保藏過程中,由于自發(fā)突變而引起特性變?nèi)趸蛳鶠榫N衰退。使衰退的菌種重新恢復(fù)原來的優(yōu)良特性,稱為菌種復(fù)壯。常用方法有：
①分離純化:將菌種接種至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基培養(yǎng)24小時,取菌液在營養(yǎng)瓊脂平板上分區(qū)劃線,培養(yǎng)后挑取典型單個菌落。
②宿主復(fù)壯:將退化菌種接種到相應(yīng)昆蟲或動植物宿主體內(nèi),傳種數(shù)代可恢復(fù)其原有的特性與毒力。
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