一、背景
溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基用于壓力蒸氣消毒過程監(jiān)測(cè)指示菌（嗜熱脂肪桿菌芽孢）的培養(yǎng)及消毒效果測(cè)定。
嗜熱脂肪芽孢桿菌（Bacillus stearothermophilus）屬嗜熱性需氧芽孢桿菌，但兼有厭氧的特性，細(xì)菌繁殖體G蘭氏染色陽性呈紫色，細(xì)菌芽胞孔雀綠著色。嗜熱脂肪芽孢桿菌比較容易識(shí)別且對(duì)人體沒有危害性，一般作為空間消毒的指示生物。
嗜熱脂肪地芽孢桿菌營養(yǎng)細(xì)胞呈長桿狀、圓端，多數(shù)為單個(gè)、少數(shù)成對(duì)或鏈狀排列，細(xì)胞寬0．6～1.μm、長2.0～3.5μm，細(xì)胞壁為革蘭陽性結(jié)構(gòu)，但染色可在陽性和陰性之間變化。芽孢呈橢圓或柱狀、端生或次端生，孢囊膨脹或不膨脹，無伴孢晶體形成。最佳生長溫度為56～60℃，最高生長溫度為65～75℃，最低生長溫度為30～45℃，需氧或兼性厭氧，利用葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。
二、原理：蛋白胨提供氮源;葡萄糖是可發(fā)酵的糖類;溴甲酚紫為pH指示劑。
三、配方(每升)：蛋白胨10g；葡萄糖5g；溴甲酚紫0.012g；最終pH7.1±0.2。
四、使用方法：
1、稱取溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基15g,加入蒸餾水或去離子水1000毫升,攪拌加熱煮沸至完全溶解,分裝試管,115℃高壓滅菌30min,混勻備用。
2、將已滅菌的嗜熱脂肪桿菌芽孢菌片投入溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中,56±1℃培養(yǎng)48小時(shí)。
3、觀察結(jié)果。
五、應(yīng)用
用于牛奶中抗生素生物抑制法快速檢測(cè)試劑盒的研發(fā)研究：
基于微生物抑制法原理,開發(fā)研制了牛奶中抗生素快速檢測(cè)試劑盒。主要完成指示菌種的篩選與誘變、芽孢液體發(fā)酵條件的優(yōu)化,芽孢萌發(fā)條件和試劑盒參數(shù)的優(yōu)化,試劑盒適用性、靈敏度和穩(wěn)定性的驗(yàn)證,以及試劑盒的應(yīng)用評(píng)價(jià)。
結(jié)果如下：
1、對(duì)嗜熱脂肪芽孢桿菌（Bacillus stearothermophilus）進(jìn)行誘變篩選,確定了嗜熱脂肪芽孢桿菌最佳紫外輻射誘變的最佳條件為:誘變時(shí)間150 s;距離30 cm。通過抗生素藥敏實(shí)驗(yàn),篩選出一株菌,并命名為嗜熱脂肪芽孢桿菌HY（B.stearothermophilus HY）。
2、對(duì)芽孢液體發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化,確定了嗜熱脂肪芽孢桿菌HY產(chǎn)孢培養(yǎng)基最佳配比:蛋白胨0.8%;酵母粉0.3%;NaCl 0.3%;Mn2+0.9 mmol/L;Ca2+10 mmol/L;最佳發(fā)酵條件為pH7.0;接種量0.1%;裝液量100 mL;培養(yǎng)時(shí)間24 h;溫度65℃。對(duì)優(yōu)化后的綜合條件進(jìn)行檢測(cè)實(shí)驗(yàn),結(jié)果液體發(fā)酵產(chǎn)孢率可達(dá)48%左右,較優(yōu)化之前提高15%左右。
3、對(duì)芽孢萌發(fā)營養(yǎng)成分、條件和試劑盒參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化,確定了芽孢萌發(fā)培養(yǎng)基最佳配比為蛋白胨1.0%;葡萄糖0.5%;瓊脂0.5%;CMC 0.2%。芽孢萌發(fā)最佳條件,溴甲酚紫40 mg/L;pH7.0。以及試劑盒生產(chǎn)所需芽孢最佳包埋量為1×l0~7 CFU/mL,培養(yǎng)基最佳裝入量為130μL/孔。
4、對(duì)試劑盒的檢出限進(jìn)行測(cè)定。對(duì)20多種抗生素的檢出限測(cè)定結(jié)果如下:四環(huán)素100μg/L;土霉素100μg/L;金霉素100μg/L;多稀環(huán)素100μg/L;磺胺嘧啶100μg/L;磺胺二甲嘧啶50-100μg/L;磺胺間二甲嘧啶50-100μg/L;磺胺甲噁唑50μg/L;磺胺噻唑50-100μg/L;磺胺多辛（磺胺鄰二甲氧嘧啶）100-200μg/L;磺胺喹惡啉50-100μg/L;青霉素1-2μg/L;阿莫西林2-4μg/L;氨卞西林2-4μg/L;頭孢氨芐50-100μg/L;苯唑西林5-10μg/L;頭孢喹肟25-100μg/L;頭孢唑啉5-10μg/L;頭孢噻呋100μg/L;慶大霉素200μg/L;卡那霉素1000-2000μg/L;新霉素500-1500μg/L;紅霉素>40μg/L;泰樂菌素50-100μg/L;替米考星75-100μg/L;螺旋霉素150-200μg/L;林可霉素100-150μg/L;氯霉素2000-2500μg/L。
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