RKO-E6人結(jié)腸癌轉(zhuǎn)基因細胞的簡介
RKO-E6細胞系是用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染pCMV-E6的結(jié)腸癌RKO細胞系。該細胞含有穩(wěn)定整合受控于巨細胞病毒啟動子的人乳頭狀病毒（HPV）E6癌基因。 RKO-E6細胞系和它的母系RKO一起可用于研究p53缺失引起的細胞參數(shù)改變p53介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄和凋亡等。
動物種別：人
性別：未知
組織來源：結(jié)腸癌，轉(zhuǎn)染插入到pCMV中的HPV E6
形態(tài)：上皮細胞
RKO-E6人結(jié)腸癌轉(zhuǎn)基因細胞培養(yǎng)步驟
細胞傳代：
1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3）棄上清，沉淀細胞用12ml完全培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代，后放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4）待細胞完全貼壁后，觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進行換液培養(yǎng)或傳代。
細胞凍存：
1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；
4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉(zhuǎn)入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。
細胞復(fù)蘇：
1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2）將凍存管中的細胞移至含5ml完全培養(yǎng)基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min；
3）棄上清，沉淀用5ml完全培養(yǎng)基重懸，接種25cm2培養(yǎng)瓶，于37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4）第二天，換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司的微生物菌種查詢網(wǎng)提供微生物菌種保藏、測序、購買等服務(wù),是中國微生物菌種保藏中心的服務(wù)平臺，并且是集微生物菌種、菌種,ATCC菌種、細胞、培養(yǎng)基為一體的大型微生物查詢類網(wǎng)站，自設(shè)設(shè)備及技術(shù)的微生物菌種保藏中心！歡迎廣大客戶來詢！