胡蘿卜軟腐病堅(jiān)固桿菌是Pectobacterium屬的微生物，原產(chǎn)地為中國(guó)。革蘭氏染色陰性細(xì)菌，兼性厭氧、桿狀細(xì)胞、不產(chǎn)孢。主要用途為研究。
一、菌種簡(jiǎn)介
平臺(tái)編號(hào)：Bio-02810
提供形式：凍干物
拉丁屬名：Pectobacterium Carotovorum
中文譯名：胡蘿卜軟腐堅(jiān)固桿菌
拉丁學(xué)名：Pectobacterium carotovorum
菌株來源：←中國(guó)科學(xué)院微生物研究所
保藏人：陳延鐘
直接來源國(guó)家：中國(guó)
保藏時(shí)間：2/16/1971
生物危害：四類
模式菌株：非模式菌株
菌株用途：測(cè)定菌；白菜軟腐病菌
培養(yǎng)溫度：30℃
培養(yǎng)基：0002
用途：測(cè)定菌; 白菜軟腐病菌
注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫(kù)為準(zhǔn)）
儲(chǔ)存條件：凍干菌種和試管斜面請(qǐng)置于 2-8℃冷藏。
二、培養(yǎng)條件
0002 營(yíng)養(yǎng)肉汁瓊脂
三、培養(yǎng)方法
1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長(zhǎng)基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種(一級(jí)種)、原種(二級(jí)種)和栽培種(三級(jí)種)三級(jí)。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種,其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩。
2、挑選具有某種能力的有用菌種,也稱種子制備,是指菌種在一定條件下,經(jīng)過擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純 菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)大菌體量及合成產(chǎn)物之用。
3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備 菌種制備。
4、保存在沙土管或冷凍管中的 菌種,用無菌手續(xù)挑取少許,接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上,在25℃(或較高溫度)下培養(yǎng)5~7天(或較長(zhǎng)時(shí)間。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子(對(duì)于霉菌類孢子制備,多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基)。
5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液,接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上,于25~28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在 上延續(xù)使用半年左右。
6、如果有些 菌種不產(chǎn)孢子,如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的,則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體,作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長(zhǎng)、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米漿),及無機(jī)鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應(yīng)生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯,無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%~20%。
四、注意事項(xiàng)
1、菌種常規(guī)培養(yǎng)時(shí)間：細(xì)菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。
2、菌種恢復(fù)培養(yǎng)前，建議將收到的菌種安瓿保存在 6-10°C 的環(huán)境下，某些菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后處于休眠狀態(tài)，延遲期較長(zhǎng)，如在說明建議的培養(yǎng)時(shí)間還未長(zhǎng)起來，請(qǐng)繼續(xù)在相應(yīng)的環(huán)境下多培養(yǎng) 24 小時(shí)或者更長(zhǎng)時(shí)間，直至菌種培養(yǎng)完成，有的菌種需要連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長(zhǎng)，一般來說菌種培養(yǎng)穩(wěn)定后才能用于您的后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
3、初次使用時(shí)請(qǐng)嚴(yán)格按照本說明書推薦條件和操作步驟進(jìn)行復(fù)活培養(yǎng)，如使用其它類型培養(yǎng)基或培養(yǎng)條件造成菌種不活等損失，我單位不負(fù)責(zé)任。
4、恢復(fù)培養(yǎng)厭氧菌時(shí)，在操作過程中應(yīng)嚴(yán)格控制厭氧條件：制作培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)使用厭氧螺口試管，并利用高純氮?dú)馊コ嚬芎团囵B(yǎng)基中的氧氣，使用者應(yīng)保證菌種的安全存儲(chǔ)和操作，帶菌廢棄物應(yīng)高壓滅菌處理后丟棄。
5、與菌種相關(guān)的其它信息請(qǐng)參閱微生物菌種查詢網(wǎng)網(wǎng)站(www.family998.com）。
五、保藏方法
1、傳代培養(yǎng)保藏法
又有斜面培養(yǎng)、穿刺培養(yǎng)、皰肉培養(yǎng)基培養(yǎng)等(后者作保藏厭氧細(xì)菌用),培養(yǎng)后于4-6℃冰箱內(nèi)保存。
2、液體石蠟覆蓋保藏法
是傳代培養(yǎng)的變相方法,能夠適當(dāng)延長(zhǎng)保藏時(shí)間,它是在斜面培養(yǎng)物和穿刺培養(yǎng)物上面覆蓋滅菌的液體石蠟,一方面可防止因培養(yǎng)基水分蒸發(fā)而引起菌種死亡,另一方面可阻止氧氣進(jìn)入,以減弱代謝作用。
3、載體保藏法
是將微生物吸附在適當(dāng)?shù)妮d體,如土壤、沙子、硅膠、濾紙上,而后進(jìn)行干燥的保藏法,例如沙土保藏法和濾紙保藏法應(yīng)用相當(dāng)廣泛。
4、寄主保藏法
用于目前尚不能在人工培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的微生物,如病毒、立克次氏體、螺旋體等,它們必須在生活的動(dòng)物、昆蟲、雞胚內(nèi)感染并傳代,此法相當(dāng)于一般微生物的傳代培養(yǎng)保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法與冷凍干燥保藏法進(jìn)行保藏。
5、冷凍保藏法
可分低溫冰箱(-20-30℃,-50-80℃)、干冰酒精快速凍結(jié)(約-70℃)和液氮(-196℃)等保藏法。
6、冷凍干燥保藏法
先使微生物在極低溫度(-70℃左右)下快速冷凍,然后在減壓下利用升華現(xiàn)象除去水分(真空干燥)。有些方法如濾紙保藏法、液氮保藏法和冷凍干燥保藏法等均需使用保護(hù)劑來制備細(xì)胞懸液,以防止因冷凍或水分不斷升華對(duì)細(xì)胞的損害。保護(hù)性溶質(zhì)可通過氫和離子鍵對(duì)水和細(xì)胞所產(chǎn)生的親和力來穩(wěn)定細(xì)胞成分的構(gòu)型。保護(hù)劑有牛乳、血清、糖類、甘油、二甲亞砜等。
六、凍干管打管說明書
1、安瓿瓶開封：用浸過 75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量（2-3滴）無菌水至加熱頂端使之破裂（應(yīng)避免過多水蒸氣影響菌種的復(fù)蘇），用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端。
2、用無菌吸管吸取 0.3ml（建議勿超過 0.5ml）適宜的液體培養(yǎng)基(不添加瓊脂)，滴入管內(nèi)，輕輕振蕩，待安瓿管內(nèi)的菌體溶解呈懸浮狀，在用無菌吸管吸取全部菌懸液接在 1-2 支建議的培養(yǎng)基試管中（不超過 2 支，中國(guó)微生物菌種查詢網(wǎng)提供的培養(yǎng)基配方中有瓊脂，請(qǐng)務(wù)必做成試管斜面，配方中沒有瓊脂，試管中液體培養(yǎng)基不超過 5ml），并在建議的條件下靜止培養(yǎng)。
3、凍干管打開后需一次用完，不能留存。另外，安瓿管內(nèi)大部分是用牛奶做保護(hù)劑，里面菌體為少數(shù)，復(fù)蘇時(shí)要全部菌懸液接在新鮮培養(yǎng)基上，否則可能造成復(fù)蘇不成功。
4、打管操作需由專業(yè)微生物技術(shù)人員在相應(yīng)的防護(hù)設(shè)備中進(jìn)行，生物危害程度為三類的菌種應(yīng)在生物安全柜中操作，打管時(shí)凍干管應(yīng)遠(yuǎn)離面部，保護(hù)眼睛。
5、打管操作應(yīng)在燒杯或托盤上方進(jìn)行，用完凍干管應(yīng)滅菌處理后丟棄。
6、菌種復(fù)蘇時(shí)，請(qǐng)務(wù)必記錄好菌種的編號(hào)和制備批號(hào)，否則不予售后。
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