一、背景
人子宮內(nèi)膜癌細胞（HEC-1-B細胞）是由H·Kuramoto于1968年分離的HEC-1-A細胞的亞株，不同于HEC-A-1的是，HEC-1-B細胞在培養(yǎng)第135天到190天之間表現(xiàn)出穩(wěn)定的生長周期，且恢復扁平，與親本細胞系相比更具鋪路石樣，HEC-1-B細胞的染色體對是親本細胞的兩倍。
細胞可以在裸鼠中形成與子宮內(nèi)膜癌（II級）一致的中等分化的腺癌，可以在類固醇治療的倉鼠中成瘤。HEC-1-B細胞可以用于3D細胞培養(yǎng)和癌癥研究，也是一種合適的轉(zhuǎn)染宿主。HEC-1-B是一種常用的人類子宮內(nèi)膜癌細胞系，它來源于正常子宮內(nèi)膜組織，具有較高的增殖能力和侵襲性。在醫(yī)學研究中，HEC-1-B常用于體外實驗，以研究腫瘤生長、侵襲和轉(zhuǎn)移機制，以及藥物篩選等。
二、人子宮內(nèi)膜癌細胞復蘇、傳代、凍存操作
（一）人子宮內(nèi)膜癌細胞復蘇
①新制100mm平皿1個，含12mL上述培養(yǎng)液；
②人子宮內(nèi)膜癌細胞凍存管從液氮或-80℃中取出，37℃水浴1~2min,待完全溶解后盡快移入安全柜復蘇；
③用無菌吸管吸取溶解液打入新制平皿中，順時針搖勻；
④放入（37℃，5%CO2）培養(yǎng)箱中，過夜換液，2-4天長滿。
注意：建議復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩，避免凍存管處于溫差較大情況下發(fā)生爆炸造成人員傷害。
（二）人子宮內(nèi)膜癌細胞傳代
將人子宮內(nèi)膜癌細胞舊培養(yǎng)液吸除，PBS清洗兩遍后，加入2mL（/100mm皿/T25瓶）胰酶（0.25%Trypsin+0.02%EDTA），在顯微鏡下觀察，期間禁止搖晃培養(yǎng)皿，人子宮內(nèi)膜癌細胞剛有脫落時，吸除大部分胰酶，留約0.5mL，移至培養(yǎng)箱消化，約1min取出。傳代用6mL培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打均勻細胞，后可1:2傳代。
（三）人子宮內(nèi)膜癌細胞凍存
凍存則用3mL凍存液（90%FBS+10%DMSO）終止消化，吹打均勻，分為3支凍存管，用程序降溫盒于-80℃凍存。
三、應用
人子宮內(nèi)膜癌細胞可以用于Bmi-1基因在調(diào)控人子宮內(nèi)膜癌細胞HEC-1B輻射耐受性中作用及機制的研究：
研究旨在探討B(tài)mi-1基因在電離輻射誘導人子宮內(nèi)膜癌細胞HEC-1B增殖、凋亡、侵襲和遷移中的作用。
方法：采用qRT-PCR檢測子宮內(nèi)膜癌組織及癌旁組織中Bmi-1mRNA表達,IHC染色檢測子宮內(nèi)膜癌組織及癌旁組織中Bmi-1陽性表達率。將HEC-1B細胞隨機分為4組:空白組(Control組)、輻射對照組(Radiation group)、Bmi-1過表達組(Bmi-1-OE group)和Bmi-1敲低組(Bmi-1-KD group)。CCK-8檢測各組細胞增殖能力,Transwell實驗檢測細胞遷移和侵襲能力,流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡情況,Western Blot檢測各組細胞MMP2、MMP7、MMP9、Rock1、RhoA、p53、p21、Bcl-2蛋白的表達。
結(jié)果：子宮內(nèi)膜癌組織中Bmi-1 mRNA的表達及組織陽性表達均明顯高于癌旁組織。經(jīng)電離輻射后Bmi-1 mRNA水平降低。電離輻射后,與輻射對照組相比,Bmi-1過表達組HEC-1B細胞經(jīng)電離輻射后的增殖、細胞遷移和侵襲能力明顯增強(p<0.05),而Bmi-1敲低組HEC-1B細胞的增殖、細胞遷移和侵襲能力明顯減弱(p<0.05)。
Bmi-1過表達組細胞凋亡率顯著降低,而Bmi-1敲低組細胞凋亡率顯著升高(p<0.05)。Bmi-1過表達組的MMP2、MMP7、MMP9、Rock1、RhoA及p53、p21、Bcl-2蛋白水平顯著升高(p<0.05),而Bmi-1敲低組MMP2、MMP7、MMP9、Rock1、RhoA及p53、p21、Bcl-2蛋白水平顯著降低(p<0.05)。
結(jié)論：Bmi-1在子宮內(nèi)膜癌組織中高表達,抑制Bmi-1表達可降低電離輻射后HEC-1B細胞的增殖、遷移和侵襲能力,促進細胞凋亡的發(fā)生,為腫瘤的臨床放療提供了新的見解。
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