一、細胞簡介
HUVEC-T1是SV40T轉(zhuǎn)化人臍靜脈內(nèi)皮細胞，它具有人體內(nèi)皮細胞的生物學(xué)特性，是心血管研究的可靠模型，可以用于心血管疾病的發(fā)病機制、新的治療方法，以及新型預(yù)防措施的研究。形態(tài)呈現(xiàn)為典型的鵝卵石樣排列，已證明在體外可傳至40代。HUVEC-T1內(nèi)皮標記vWF、CD31、CD34均陽性，可結(jié)合凝集素，電鏡下可見緊密連接和W-P小體，Matrigle上可形成管型。不同代數(shù)的HUVEC-T1細胞核型正常穩(wěn)定（P12、P13、P19、P38），裸鼠體內(nèi)接種不成瘤（P9和P33）。
二、產(chǎn)品信息
平臺編號：Bio-108932
規(guī)格：1×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
細胞信息：PUMC-HUVEC-T1
細胞名稱：PUMC-HUVEC-T1（SV40T轉(zhuǎn)化人臍靜脈內(nèi)皮細胞）
種屬：人
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
背景描述：PUMC-HUVEC-T1形態(tài)呈現(xiàn)為典型的鵝卵石樣排列，已證明在體外可傳至40代。PUMC-HUVEC-T1內(nèi)皮標記vWF、CD31、CD34均陽性，可結(jié)合凝集素，電鏡下可見緊密連接和W-P小體，Matrigle上可形成管型。不同代數(shù)的HUVEC-T1細胞核型正常穩(wěn)定（P12、P13、P19、P38），裸鼠體內(nèi)接種不成瘤（P9和P33）。
生長培養(yǎng)基：DMEM＋0.01mg/mL Insulin＋1% NEAA+10% FBS(164210)＋1% P/S
推薦換液頻率：2~3次/周
凍存條件：凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO溫度：液氮
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
用途：(STR鑒定正確)
注意事項：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準）
三、使用方法
1、懸浮細胞,2000rpm離心5min收集細胞;對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短(過長細胞膜破碎,造成假陽性,過短,細胞黏連影響檢測)*是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,吸除胰酶消化液,加入細胞培養(yǎng)液終止消化,2000rpm離心5min收集細胞。
2、4℃預(yù)冷PBS,洗滌細胞2次(2000rpm x 5min),收集細胞2~5×105 。
3、離心棄上清,加入500μL結(jié)合緩沖液,輕輕吹打重懸細胞。
4、加入5μL Annexin V-FITC,輕輕吹打混勻,加入5μL PI 輕輕吹打混勻,室溫避光孵育5-15min。(PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,時間允許,可以在檢測前5分鐘加入PI)
5、流式細胞儀檢測或熒光顯微鏡觀察。*在1h內(nèi)檢測。
四、實驗報告
（一）分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,*將組織剪成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織完全被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
（二）免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,*在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司的微生物菌種查詢網(wǎng)提供微生物菌種保藏、測序、購買等服務(wù),是中國微生物菌種保藏中心的服務(wù)平臺，并且是集微生物菌種、菌種,ATCC菌種、細胞、培養(yǎng)基為一體的大型微生物查詢類網(wǎng)站，自設(shè)設(shè)備及技術(shù)的微生物菌種保藏中心！歡迎廣大客戶來詢！