一、菌種簡(jiǎn)介
平臺(tái)編號(hào)：Bio-54579
規(guī)格：250g
相關(guān)信息：/
菌株名稱：伊紅美藍(lán)瓊脂(EMB)
規(guī)格：250g
用途：弱選擇性培養(yǎng)基、用于分離腸道致病菌，特別是大腸桿菌(GB、SN標(biāo)準(zhǔn))
注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫(kù)為準(zhǔn)）
二、成分(g/L)
蛋白胨 10.0g
乳糖 10.0g
磷酸氫二鉀 2.0g
瓊脂 15.0g
伊紅 0.4g
美藍(lán) 0.065g
PH值 7.1±0.2
三、用法
稱取本品 3.74克,加熱溶解100ml蒸餾水中,121℃高壓滅菌15分鐘,備用。
四、質(zhì)量控制和典型特征
在36±1℃培養(yǎng)24±2h,典型大腸桿菌菌落特征為具黑色中心有金屬光澤或無(wú)光澤。
五、微生物檢測(cè)中培養(yǎng)基的質(zhì)量控制措施
1、伊紅美藍(lán)瓊脂(EMB)的購(gòu)置與驗(yàn)收
1.1 購(gòu)置
從培養(yǎng)基自身的質(zhì)量來(lái)看,不同生產(chǎn)廠家的產(chǎn)品,甚至同一廠家不同批號(hào)的產(chǎn)品都會(huì)存在差異。依據(jù)ISO/IEC17025《檢測(cè)和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力的通用要求》,對(duì)培養(yǎng)基的供應(yīng)企業(yè)進(jìn)行評(píng)價(jià)后選擇合格的供應(yīng)商,這是培養(yǎng)基購(gòu)買過程中重要的步驟。應(yīng)選擇產(chǎn)品市場(chǎng)信譽(yù)度高、有質(zhì)量保證能力和服務(wù)保證能力的企業(yè);企業(yè)是否通過了質(zhì)量管理體系的認(rèn)證是較為客觀的評(píng)價(jià)指標(biāo)。要求生產(chǎn)企業(yè)提供:培養(yǎng)基成分名稱及產(chǎn)品編號(hào)、批號(hào)、使用前的pH、儲(chǔ)藏信息和有效期、性能評(píng)價(jià)和所用測(cè)試菌株、技術(shù)數(shù)據(jù)清單、質(zhì)控證書以及必要的安全/危害數(shù)據(jù)等材料。
1.2 驗(yàn)收
購(gòu)買的培養(yǎng)基到貨后,應(yīng)有專人做好接受和驗(yàn)收工作,應(yīng)仔細(xì)核對(duì)生產(chǎn)企業(yè)提供的資料、培養(yǎng)基名稱、規(guī)格數(shù)量、外觀特征、批號(hào)、保質(zhì)期是否符合要求。每批培養(yǎng)基到貨物后都應(yīng)對(duì)培養(yǎng)基的質(zhì)量進(jìn)行檢測(cè),滿足檢測(cè)方法規(guī)定的要求后方可投入使用。
2、伊紅美藍(lán)瓊脂(EMB)的儲(chǔ)存
干粉培養(yǎng)基應(yīng)保存在陰涼干燥處,要避免陽(yáng)光直射;未開瓶的培養(yǎng)基保存期限應(yīng)按照生產(chǎn)廠家提供的信息執(zhí)行,開瓶后的干粉培養(yǎng)基易吸濕,應(yīng)注意防潮并盡快用完。應(yīng)定期對(duì)儲(chǔ)存中的培養(yǎng)基進(jìn)行常規(guī)檢查,如容器密閉性復(fù)查、*開封日期、內(nèi)容物的感官檢查,如果培養(yǎng)基發(fā)生結(jié)塊、顏色異常和其他變質(zhì)跡象就不能再使用。
3、培養(yǎng)基的制備
3.1 伊紅美藍(lán)瓊脂(EMB)用水
培養(yǎng)基制備用水應(yīng)使用電阻率不小于30萬(wàn)Ωcm的蒸餾水或與其同質(zhì)的水,*不使用離子交換器生產(chǎn)的去離子水。
3.2 稱量
稱量時(shí)要用專用的角匙,避免交叉污染而影響檢驗(yàn)結(jié)果;干粉培養(yǎng)基易吸潮,如有條件,盡量在濕度較低的房間稱取培養(yǎng)基。
3.3 復(fù)水
復(fù)水時(shí)不得用銅鍋或鐵鍋,以防有離子混入培養(yǎng)基中,影響微生物的生長(zhǎng);容器的大小需大于復(fù)水后培養(yǎng)基總體積的2倍以上,避免在加熱溶解過程中,培養(yǎng)基溢出;含有瓊脂粉的培養(yǎng)基,在加熱溶解之前可以浸泡數(shù)分鐘;加熱培養(yǎng)基時(shí)一定要進(jìn)行攪拌,特別是瓊脂類培養(yǎng)基。為避免燒焦和沸騰溢出,對(duì)于少量的培養(yǎng)基*使用沸水浴進(jìn)行加熱。燒糊的培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)被破壞,并可產(chǎn)生有毒物質(zhì),如發(fā)現(xiàn)焦化,或未溶解均勻前培養(yǎng)基有溢出,該培養(yǎng)基即不能使用,應(yīng)重新制備。
3.4 滅菌
一般培養(yǎng)基采用濕熱滅菌,即高壓蒸汽滅菌,通常是121℃ 15 min,含糖或特殊培養(yǎng)基,按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)或生產(chǎn)商提供的說明滅菌。已配制好的培養(yǎng)基必須立即滅菌,避免微生物生長(zhǎng)繁殖而消耗養(yǎng)分,改變培養(yǎng)基的酸堿度。高溫可破壞培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分,還會(huì)使瓊脂的凝膠強(qiáng)度下降,因此必須嚴(yán)格控制滅菌溫度和時(shí)間,并且不可重復(fù)滅菌。高壓蒸汽滅菌鍋的壓力表等要定期進(jìn)行檢定,并定期采用生物指示菌法或化學(xué)變色紙片對(duì)滅菌效果進(jìn)行驗(yàn)證。
3.5 pH測(cè)定
微生物必須在適宜的pH范圍內(nèi)才能正常生長(zhǎng)繁殖或體現(xiàn)其生物特性。培養(yǎng)基配方要求的pH為滅菌或消毒后的pH 值,即培養(yǎng)基使用前的pH,并應(yīng)在25℃溫度下采用精密酸度計(jì)進(jìn)行測(cè)量,固體瓊脂培養(yǎng)基應(yīng)以特殊的膠體表面測(cè)量電極進(jìn)行測(cè)量。使用過程中,如果需要調(diào)整培養(yǎng)基的pH,應(yīng)用1mol/L Na0H或 lmol/L HCL調(diào)整,注意不可反復(fù)調(diào)pH,否則會(huì)影響培養(yǎng)基的滲透壓。
3.6 配制好的培養(yǎng)基保存
滅菌以后培養(yǎng)基應(yīng)該迅速冷卻至所需溫度,避免長(zhǎng)時(shí)間保存在滅菌鍋內(nèi),造成過度滅菌,影響培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分或選擇性效果。所配制的培養(yǎng)基的量,應(yīng)該是在最長(zhǎng)保存期限內(nèi)正好使用完。含染料的培養(yǎng)基應(yīng)閉光保存;倒好的瓊脂平板如果配制的當(dāng)天未使用完,應(yīng)于冷藏保存,如果保存時(shí)間超過2天,應(yīng)將其放入密封的塑料袋中保存。
4、伊紅美藍(lán)瓊脂(EMB)的性能測(cè)試
4.1 外觀控制
制備好的培養(yǎng)基應(yīng)有相應(yīng)的顏色,一般的培養(yǎng)基應(yīng)澄清、無(wú)渾濁、無(wú)沉淀。使用前應(yīng)檢查培養(yǎng)基的顏色是否發(fā)生變化,是否蒸發(fā)/脫水。
4.2 污染控制
從每批制備好的培養(yǎng)基中選取部分進(jìn)行污染測(cè)試(無(wú)菌試驗(yàn)),確定無(wú)微生物生長(zhǎng)方可使用。
4.3 性能測(cè)試
4.3.1 測(cè)試菌株選擇 測(cè)試菌株是具有其代表種的穩(wěn)定特性并能有效證明實(shí)驗(yàn)室特定培養(yǎng)基*性能的一套菌株,應(yīng)來(lái)自國(guó)際/國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)菌種保藏中心ATCC標(biāo)準(zhǔn)菌株,菌株的選擇參考衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T232-2002《商業(yè)性微生物培養(yǎng)基質(zhì)量檢驗(yàn)規(guī)程》。
4.3.2 定量測(cè)試方法 改良Miles-Misra法 測(cè)試菌株過夜培養(yǎng)物10倍遞增稀釋;測(cè)試平板和參照平板劃分為4個(gè)區(qū)域并標(biāo)記;從*稀釋度開始,分別滴一滴稀釋液于試驗(yàn)平板和對(duì)照平板標(biāo)記好的區(qū)域;將稀釋液涂滿整個(gè)1/4區(qū)域,37°C培養(yǎng)18小時(shí);對(duì)易計(jì)數(shù)的區(qū)域計(jì)數(shù),按公式計(jì)算生長(zhǎng)率(生長(zhǎng)率=待測(cè)培養(yǎng)基平板上得到的菌落總數(shù)/參考培養(yǎng)基平板上獲得的菌落總數(shù))。非選擇性培養(yǎng)基上目標(biāo)菌的生長(zhǎng)率應(yīng)不低于0.7,該類培養(yǎng)基應(yīng)易于目標(biāo)菌生長(zhǎng);選擇性培養(yǎng)基上目標(biāo)菌的生長(zhǎng)率應(yīng)不低于0.1 。
4.3.3 半定量測(cè)試方法 改進(jìn)的劃線法接種法 平板分ABCD四區(qū),共劃16條線,平行線大概相隔0.5cm,每條有菌落生長(zhǎng)的劃線記作1分,每個(gè)僅一半的線有菌落生長(zhǎng)記作0.5分,沒有菌落生長(zhǎng)或生長(zhǎng)量少于劃線的一半記作0分,分?jǐn)?shù)加起來(lái)得到生長(zhǎng)指數(shù)G。目標(biāo)菌在培養(yǎng)基上應(yīng)呈現(xiàn)典型的生長(zhǎng),而非目標(biāo)菌的生長(zhǎng)應(yīng)部分或完全被抑制,目標(biāo)菌的生長(zhǎng)指數(shù)G大于6時(shí),培養(yǎng)基可接受 。
4.3.4 定性測(cè)試方法 平板接種觀察法 用接種環(huán)取測(cè)試菌培養(yǎng)物,在測(cè)試培養(yǎng)基表面劃平行直線。按標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的培養(yǎng)時(shí)間和溫度對(duì)接種后的平板進(jìn)行培養(yǎng),目標(biāo)菌應(yīng)呈現(xiàn)良好生長(zhǎng),并有典型的菌落外觀、大小和形態(tài),非目標(biāo)菌應(yīng)是微弱生長(zhǎng)或無(wú)生長(zhǎng)。
5、討論
伊紅美藍(lán)瓊脂(EMB)的質(zhì)量是微生物實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作的基礎(chǔ),事關(guān)檢測(cè)工作的準(zhǔn)確性、可靠性,在微生物實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作中舉足輕重。如果在工作中忽視任何一個(gè)環(huán)節(jié)的質(zhì)量問題,都將導(dǎo)致檢驗(yàn)結(jié)果科學(xué)性、客觀性的偏離。因此,加強(qiáng)培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制,認(rèn)真地做好培養(yǎng)基的質(zhì)控工作,不斷完善和提高培養(yǎng)基的質(zhì)控水平,才能為微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室提供高質(zhì)量的培養(yǎng)基。
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