一、背景
SW1088細(xì)胞系具有較高的增殖能力和自我更新能力，同時(shí)也容易進(jìn)行基因突變和表達(dá)調(diào)控等實(shí)驗(yàn)操作。因此，它成為了神經(jīng)膠質(zhì)瘤研究領(lǐng)域中一種重要的細(xì)胞模型。
二、SW1088細(xì)胞系|人腦星形膠質(zhì)瘤細(xì)胞的復(fù)蘇操作步驟
1、準(zhǔn)備培養(yǎng)基：使用DMEM/F12培養(yǎng)基(含10%胎牛血清、1%青霉素-鏈霉素溶液和0.25%的非必需氨基酸),并添加1%的L-谷氨酰胺和1%的β-巰基乙醇。
2、準(zhǔn)備細(xì)胞凍存液：將SW1088細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管中，用離心機(jī)離心5分鐘(4000rpm),然后用PBS洗滌兩次。接著，將細(xì)胞沉淀加入含有50ml DMEM/F12培養(yǎng)基的冰上預(yù)冷的離心管中。在室溫下緩慢加入5ml冷凍保存液(含DMSO),輕輕搖晃使細(xì)胞充分接觸冷凍保存液。將該管放入冰箱中，等待冷凍保存液完全滲透到細(xì)胞中。最后，用新的DMEM/F12培養(yǎng)基替換掉原來(lái)的冷凍保存液。
3、解凍細(xì)胞：將含有SW1088細(xì)胞的離心管放在冰上，等待其完全解凍。注意不要讓細(xì)胞沉淀重新懸浮在液體中。
4、SW1088細(xì)胞系|人腦星形膠質(zhì)瘤細(xì)胞傳代培養(yǎng)：當(dāng)SW1088細(xì)胞達(dá)到約70%~80%的密度時(shí)，將其轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿或瓶子中進(jìn)行傳代培養(yǎng)。通常情況下，每隔2-3天進(jìn)行一次傳代。
需要注意的是，在進(jìn)行SW1088細(xì)胞復(fù)蘇操作時(shí)，一定要注意無(wú)菌操作，避免污染。此外，為了保證細(xì)胞的健康生長(zhǎng)，還需根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)需求調(diào)整培養(yǎng)條件和藥物處理方案。
三、SW1088細(xì)胞系|人腦星形膠質(zhì)瘤細(xì)胞在進(jìn)行細(xì)胞凍存之前，需要做好以下準(zhǔn)備工作
1、細(xì)胞培養(yǎng)：將SW1088細(xì)胞培養(yǎng)到所需的密度，通常為80%-90%。確保細(xì)胞生長(zhǎng)良好，沒(méi)有明顯的病變或死亡。
2、凍存試劑：選擇合適的凍存試劑，如冷凍保護(hù)劑、DMSO等。這些試劑可以保護(hù)細(xì)胞免受冰晶損傷，并有助于細(xì)胞復(fù)蘇。
3、凍存設(shè)備：準(zhǔn)備適當(dāng)?shù)膬龃嬖O(shè)備，如液氮罐、冷凍機(jī)等。確保設(shè)備的溫度穩(wěn)定，并且符合凍存要求。
4、凍存操作：將SW1088細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到凍存管中，并加入適量的凍存試劑。然后將凍存管放入液氮罐中，等待細(xì)胞凍結(jié)。在凍存過(guò)程中，需要定期檢查細(xì)胞的狀態(tài)，以確保細(xì)胞沒(méi)有受到冰晶損傷。
5、復(fù)蘇操作：當(dāng)需要使用SW1088細(xì)胞時(shí)，需要先將其從液氮罐中取出，然后將其轉(zhuǎn)移到復(fù)蘇培養(yǎng)基中進(jìn)行復(fù)蘇。在復(fù)蘇過(guò)程中，需要控制好溫度和時(shí)間，以避免細(xì)胞受到過(guò)度刺激或死亡。
四、應(yīng)用
SW1088細(xì)胞系|人腦星形膠質(zhì)瘤細(xì)胞可以用于膠質(zhì)瘤細(xì)胞糖蛋白及糖鞘脂特異性糖鏈譜研究：
利用凝集素芯片技術(shù)分析多種膠質(zhì)瘤細(xì)胞的總蛋白、膜蛋白及糖鞘脂糖鏈譜,并將之與正常膠質(zhì)細(xì)胞糖鏈譜相比較,分析膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的異常表達(dá)糖鏈結(jié)構(gòu),最終為發(fā)現(xiàn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的糖鏈結(jié)構(gòu)標(biāo)記物提供一個(gè)新的思路。
實(shí)驗(yàn)方法：本研究以?xún)芍昴z質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞U87MG和A172,兩株星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞SW1088和CCF-STTG1,以及一株永生化正常膠質(zhì)細(xì)胞SVGp12為研究對(duì)象。對(duì)上述細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)后,分別提取細(xì)胞的總蛋白、膜蛋白和糖鞘脂,之后對(duì)所獲取樣本進(jìn)行熒光標(biāo)記,并將之與凝集素芯片孵育,隨后掃描獲取芯片圖像并利用GenePix7.0軟件讀取熒光信號(hào)值。接下來(lái)對(duì)實(shí)驗(yàn)所獲取之原始數(shù)據(jù)進(jìn)行中值歸一化和Raito值分析,分別比較不同細(xì)胞間的糖蛋白糖鏈譜和糖鞘脂糖鏈譜的差異,篩選膠質(zhì)瘤細(xì)胞中具有顯著性差異表達(dá)的糖鏈結(jié)構(gòu)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果：在總蛋白糖鏈譜的研究與比較中,在四株膠質(zhì)瘤細(xì)胞中共篩選出15種具有整體顯著性上調(diào)/下調(diào)(Ratio≥1.5 or Ratio≤0.67,p≤0.05)趨勢(shì)的凝集素。其中ECA識(shí)別的Galβ1-3/4GlcNAc、WFA識(shí)別的GalNAcα/β1-3/6Gal、MAL-Ⅱ識(shí)別的Siaα2-3Gal/GalNAc、PHA-E識(shí)別的Bisecting GlcNAc、PTL-I識(shí)別的GalNAc,GalNAcα1-3Gal和GalNAcα1-3Galβ1-3/4Glc、PNA識(shí)別的Galβ1-3GalNAc-Ser/Ter(T)、EEL識(shí)別的Galα1-3(Fucα1-2)Gal、LTL識(shí)別的Fucαl-2Galβ1-4GlcNAc和Fucα1-3(Galβ1-4)GlcNAc、GSL-I識(shí)別的αGalNAc和αGal、VVA識(shí)別的GalNAc和GalNAcα1-3Gal-Ser/Ter(Tn)、MAL-I識(shí)別的Galβ1-3/4GlcNAc均有較顯著上調(diào)趨勢(shì),而NPA識(shí)別的High-Mannose和Manαl-6Man、PWM識(shí)別的Branched(LacNAc)n、GNA識(shí)別的High-Mannose和Manα1-3Man、BPL識(shí)別的Galβ1-3GalNAc和Terminal GalNAc均有較顯著下調(diào)趨勢(shì)。在膜蛋白糖鏈譜的研究與比較中,在四株膠質(zhì)瘤細(xì)胞中共篩選出了6種具有整體顯著性上調(diào)/下調(diào)趨勢(shì)的凝集素。
其中PNA識(shí)別的Galβ1-3GalNAc-Ser/Ter(T)以及VVA識(shí)別的GalNAc和GalNAcα1-3Gal-Ser/Ter(Tn)顯著性上調(diào),而LEL識(shí)別的(GlcNAc)n、SNA識(shí)別的Siaα2-6Gal/GalNAc、LTL識(shí)別的Fucα1-2Galβ1-4GlcNAc和Fucα1-3(Galβ1-4)GlcNAc以及PTL-I所識(shí)別的GalNAc,GalNAcα1-3Galβ1-3/4Glc和GalNAcα1-3Gal顯著性下調(diào)。由于糖鞘脂糖鏈與糖蛋白糖鏈有一定差異,相同凝集素所識(shí)別糖鏈在兩組樣本中不一定完全相同,在糖鞘脂糖鏈譜的比較中,在四株膠質(zhì)瘤細(xì)胞中共篩選出10種具有整體顯著性上調(diào)/下調(diào)趨勢(shì)的凝集素。
其中EEL識(shí)別的Galα1-3(Fucα1-2)Gal以及MAL-I識(shí)別的Galβ1-4GlcNAc均顯著性上調(diào),而NPA識(shí)別的Fucα1-4GlcNAc和poly-Man、GNA識(shí)別的α1-3Man和Galα1-3Galβ1-4GlcNAc、MPL識(shí)別的Galβ1-3GalNAc,Galβ1-3GlcNAc和GalNAc、HHL識(shí)別的α1-3/1-6Man和Galα1-3Galβ1-4GlcNAc、LCA識(shí)別的Fucα1-6GlcNAc、PSA識(shí)別的Fucα1-6GlcNAc和Fucα1-3GlcNAc均顯著性下調(diào)。
由上述發(fā)現(xiàn)進(jìn)一步整理篩選可得,膠質(zhì)瘤細(xì)胞總蛋白中Galβ1-3/4GlcNAc、Siaα2-3Gal/GalNAc、Bisecting GlcNAc、Fucαl-3(Galβ1-4)GlcNAc、Galα1-3(Fucα1-2)Gal、GalNAcα1-3Galβ1-3/4Glc、GalNAc-Gal等結(jié)構(gòu)糖鏈顯著性上調(diào),而High-Mannose、Branched(LacNAc)n糖鏈顯著性下調(diào)。在膠質(zhì)瘤細(xì)胞膜蛋白中Gal-GalNAc結(jié)構(gòu)糖鏈上調(diào),而Siaα2-6Gal/GalNAc、Fucαl-3(Galβ1-4)GlcNAc、GalNAcαl-3Galβ1-3/4Glc、(GlcNAc)n糖鏈顯著性下調(diào)。在膠質(zhì)瘤細(xì)胞糖鞘脂中Galα1-3(Fucα1-2)Gal、Galβ1-4GlcNAc顯著性上調(diào),而Galal-3Galβ1-4GlcNAc、Fuc-GlcNAc、Gal-GlcNac結(jié)構(gòu)糖鏈顯著性下調(diào)。其中值得注意的是,膜蛋白中Siaα2-6Gal/GalNAc具有下調(diào)趨勢(shì)且差異極其顯著(p≤0.01),但該糖鏈在總蛋白樣本中雖有下調(diào)趨勢(shì)但差異性不顯著(p≥0.05)。
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