一、背景
大鼠脾淋巴細(xì)胞是一種來源于大鼠脾臟的淋巴細(xì)胞系。這些細(xì)胞具有免疫細(xì)胞的特征，可以用于研究免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、傳染病學(xué)等領(lǐng)域。
大鼠脾淋巴細(xì)胞可以通過體外培養(yǎng)獲得，常用的培養(yǎng)方法包括貼壁法和懸浮法。貼壁法是將大鼠脾淋巴細(xì)胞接種在含有特定培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，經(jīng)過一段時間的生長和分化，形成單層貼壁的淋巴細(xì)胞。懸浮法是將大鼠脾淋巴細(xì)胞懸浮在含有特定培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，通過離心等方法分離出淋巴細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。
大鼠脾淋巴細(xì)胞在研究中具有廣泛的應(yīng)用價值，例如可以用于研究免疫應(yīng)答的機(jī)制、腫瘤免疫治療、病原體感染的免疫應(yīng)答等。此外，還可以用于藥物篩選和毒性評價等領(lǐng)域的研究。
二、大鼠脾淋巴細(xì)胞培養(yǎng)操作
1)復(fù)蘇大鼠脾淋巴細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)大鼠脾淋巴細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
c、按6-8 mL/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3)大鼠脾淋巴細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。
下面T25瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
三、應(yīng)用
大鼠脾淋巴細(xì)胞可以用于IRE1/XBP1對重癥急性胰腺炎大鼠脾淋巴細(xì)胞凋亡的作用研究：
探討IRE1/XBP1對重癥急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)大鼠脾淋巴細(xì)胞凋亡的作用。
方法：30只SPF級別的成年雄性SD實驗大鼠,隨機(jī)分成假手術(shù)組(Sham-operated group,SO組)、SAP 6h組及SAP 12h組,每組各10只。5%?；悄懰徕c溶液胰膽管逆行注射構(gòu)建SAP實驗動物模型,SO組大鼠只是翻動胰腺后隨即關(guān)腹做實驗對照組。
SO組大鼠于術(shù)后12h取材,SAP組大鼠分別于術(shù)后6h、12h取材,利用紫外分光光度計測定所有實驗大鼠血清淀粉酶及脂肪酶含量,大鼠胰腺組織采用HE染色觀察病理嚴(yán)重程并進(jìn)行病理評分,流式細(xì)胞術(shù)檢測脾淋巴細(xì)胞凋亡率,透射電鏡觀察脾淋巴細(xì)胞凋亡形態(tài),RT-q PCR、Western blot法檢測大鼠脾淋巴細(xì)胞IRE1、XBP1、凋亡相關(guān)基因Bax及Caspase-3 mRNA和蛋白表達(dá)水平。
結(jié)果：(1)與SO組相比,SAP組脾淋巴細(xì)胞凋亡率明顯增高,在6h達(dá)到高峰,12h時稍下降,但仍高于SO組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
(2)SO組大鼠脾淋巴細(xì)胞IRE1、XBP1 mRNA及蛋白呈低表達(dá);與SO組比,SAP組大鼠脾淋巴細(xì)胞IRE1、XBP1表達(dá)水平升高,SAP 12h組升高更為明顯,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
(3)SO組大鼠脾淋巴細(xì)胞Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白呈低表達(dá),與SO組比,SAP組大鼠脾淋巴細(xì)胞Bax、Caspase-3的表達(dá)水平明顯升高,在6h時達(dá)到高峰,12h稍下降,但仍高于SO組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
(4)SAP 6h組、12h組大鼠脾淋巴細(xì)胞IRE1、XBP1蛋白表達(dá)水平與Bax、Caspase-3蛋白表達(dá)水平呈正相關(guān)(均P<0.05),隨著IRE1和XBP1表達(dá)水平升高,Bax、Caspase-3蛋白表達(dá)水平隨之升高。
(5)SAP6h組、12h組大鼠脾淋巴細(xì)胞IRE1、XBP1蛋白表達(dá)水平與淋巴細(xì)胞的凋亡呈正相關(guān)(均P<0.05),隨著IRE1和XBP1表達(dá)水平升高,淋巴細(xì)胞凋率增高。
結(jié)論：SAP大鼠脾淋巴細(xì)胞IRE1/XBP1表達(dá)水平明顯升高,淋巴細(xì)胞凋亡增多;IRE1/XBP1高表達(dá)引起B(yǎng)ax和Caspase-3的表達(dá)水平升高,可能是導(dǎo)致SAP大鼠脾淋巴細(xì)胞凋亡增多的重要原因。
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