一、背景
LA-795小鼠肺腺癌細(xì)胞系是一種常用的實(shí)驗(yàn)細(xì)胞系，來(lái)源于小鼠的肺腺癌組織。這種細(xì)胞系具有穩(wěn)定的生長(zhǎng)特性和一定的增殖能力，常用于肺癌研究、藥物篩選和疫苗研制等領(lǐng)域。
在生物學(xué)特性方面，LA-795小鼠肺腺癌細(xì)胞系系呈貼壁生長(zhǎng)，具有上皮細(xì)胞的形態(tài)和特點(diǎn)。這種細(xì)胞系對(duì)化療藥物和放療具有一定的敏感性，可用于研究肺癌的治療方法。此外，LA-795小鼠肺腺癌細(xì)胞系中存在某些與肺癌相關(guān)的基因突變，如K-Ras基因突變等，這些突變可以作為肺癌研究的模型之一。
在應(yīng)用方面，LA-795小鼠肺腺癌細(xì)胞系被廣泛用于肺癌的研究和治療。這種細(xì)胞系可以用于體外藥物篩選和疫苗研制，也可以用于研究肺癌的發(fā)病機(jī)制和傳播途徑。此外，LA-795小鼠肺腺癌細(xì)胞系還可以用于制備抗體和其他生物分子，為生物醫(yī)學(xué)研究提供了重要的工具和資源。
二、LA-795小鼠肺腺癌細(xì)胞系細(xì)胞使用說明
1、LA-795小鼠肺腺癌細(xì)胞系細(xì)胞株的復(fù)蘇
a.將凍存管在37℃水浴鍋中迅速完全融化(保持凍存管的蓋子在液面以上以防止污染)，并適當(dāng)輕輕搖晃促融，切勿vortex?？焖佟⑼耆诨梢蕴岣呒?xì)胞的復(fù)蘇效果。
b.打開凍存管前時(shí)用70%酒精擦拭細(xì)胞凍存管外壁，注意某些記號(hào)筆不耐酒精，小心標(biāo)注的記號(hào)被擦拭掉。
c.將完全融化的細(xì)胞直接離心，或者轉(zhuǎn)移至無(wú)菌1.5ml或其它合適無(wú)菌離心管中，500×g離心2-5min，吸除上清，注意不要吸走細(xì)胞沉淀，然后用新鮮完全培養(yǎng)液重懸后轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)器皿，混勻，置于CO2培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)。
d.第二天視貼壁或生長(zhǎng)狀態(tài)，更換培養(yǎng)液。
2、LA-795小鼠肺腺癌細(xì)胞系細(xì)胞的常規(guī)傳代流程
a.將細(xì)胞培養(yǎng)液、PBS等放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱。
b.以10cm細(xì)胞培養(yǎng)皿為例。吸出原培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)液，用2-5ml無(wú)菌PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次以去除殘留的血清(如果細(xì)胞貼壁較差，潤(rùn)洗時(shí)要輕柔以避免細(xì)胞飄起)，然后加1-2ml胰酶細(xì)胞消化液(含EDTA)室溫消化，注意消化時(shí)間，通常為1-5分鐘。如果細(xì)胞比較難消化，可以置于37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱一定時(shí)間以加速消化。注意：消化時(shí)間過長(zhǎng)，會(huì)導(dǎo)致傳代后細(xì)胞出現(xiàn)生長(zhǎng)狀態(tài)不良的情況。
c.每30秒-1分鐘用顯微鏡觀察細(xì)胞消化情況，貼壁細(xì)胞明顯收縮、細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起，并用移液器吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái)時(shí)，吸除胰酶細(xì)胞消化液，再加入1-2ml新鮮完全培養(yǎng)液，適當(dāng)晃動(dòng)細(xì)胞皿以終止胰酶作用，用移液器輕輕吹打貼壁的細(xì)胞，獲取細(xì)胞懸液。吹打時(shí)需控制力度，避免產(chǎn)生大量氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~5個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)皿內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)液，置于CO2培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)，第2天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況。
d.也可以在消化后，加3-5ml完全培養(yǎng)液終止消化，用移液器輕輕吹打細(xì)胞懸液，盡量把細(xì)胞全部吹落、吹散，然后將全部細(xì)胞懸液500×g離心2-5min，離心后去上清，再用完全培養(yǎng)液重懸后轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿中，添加適量完全培養(yǎng)液，于CO2培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)。
e.注意培養(yǎng)液的酚紅顏色變化或根據(jù)細(xì)胞的換液要求定期換液，待細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)需要傳代或者凍存。如果沒有及時(shí)傳代導(dǎo)致細(xì)胞過密，傳代后細(xì)胞容易出現(xiàn)生長(zhǎng)狀態(tài)不良的情況。
三、應(yīng)用
LA-795小鼠肺腺癌細(xì)胞系可以用于LA795細(xì)胞不同轉(zhuǎn)移率克隆株的建立及其轉(zhuǎn)移相關(guān)特性的研究：
正常細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化實(shí)際上是源于細(xì)胞功能的系統(tǒng)紊亂，對(duì)瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移行為的研究也存在同樣的系統(tǒng)復(fù)雜性；因此，為最終闡明瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移機(jī)制，首先必須對(duì)其轉(zhuǎn)移相關(guān)性質(zhì)有深入的了解。
以我國(guó)腫瘤工作者自己建立的LA-795小鼠肺腺癌細(xì)胞系為基礎(chǔ)，從中分離了4個(gè)具不同轉(zhuǎn)移潛能的克隆株，并對(duì)其多方面的轉(zhuǎn)移相關(guān)性質(zhì)進(jìn)行了系統(tǒng)的研究。
主要實(shí)驗(yàn)結(jié)論如下：
(1)論文首先建立了一個(gè)對(duì)不同惡性度腫瘤細(xì)胞進(jìn)行克隆分離的有效方法并利用這一方法從LA795細(xì)胞母系獲得了4個(gè)具不同轉(zhuǎn)移潛能的克株，即LA1、LAE、LAD、LA5，其同基因T739小鼠體內(nèi)肺自發(fā)轉(zhuǎn)移率分別為0％、0％、16％、32％。
(2)在不同轉(zhuǎn)移潛能克隆株建立之后，論文從組織形態(tài)、超微結(jié)構(gòu)、細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)等方面對(duì)其進(jìn)行了描述。在對(duì)瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞接觸結(jié)構(gòu)的研究中，論文建立了一個(gè)可用于特殊研究目的的膜系統(tǒng)弱消化法，并利用這一方法發(fā)現(xiàn)了瘤細(xì)胞和正常組織細(xì)胞間柱狀交通結(jié)構(gòu)(直徑0.05-1.5um)的存在，這一發(fā)現(xiàn)對(duì)研究瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞間相互作用的機(jī)制具有一定意義。
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