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類志賀鄰單胞菌的菌株培養(yǎng)與使用范圍及注意事項!
小楊 / 2023-11-20 09:18:14


類志賀鄰單胞菌簡稱PS,是廣泛分布在淡水環(huán)境中的細(xì)菌,被認(rèn)為是食物中毒和腹瀉的新病原菌。為檢測其毒性和對藥物的敏感性,我們于1989年對獲自腹瀉病人和體檢人員糞標(biāo)本的4株P(guān)S菌進(jìn)行了檢測。

一、菌種簡介
平臺編號:Bio-098163
規(guī)格:凍干物
拉丁屬名:Plesiomonas Shigelloides
菌株名稱:類志賀鄰單胞菌
收藏時間:2009/9/18
原產(chǎn)國:德國
資源歸類編碼:15131122110
模式菌株:模式菌株
主要用途:分類;研究;教學(xué)
特征特性:桿菌,0.8~1.0μm×3.0μ m。革蘭氏陰性。通常以極生鞭毛運(yùn)動。兼性厭氧,化能異養(yǎng)菌。具有呼吸和發(fā)酵代謝類型,最適生長溫度37℃。對葡萄糖和其他糖類能產(chǎn)酸但不產(chǎn)氣。氧化酶和接觸酶皆陽性。產(chǎn)吲哚。V-P陰性。賴氨酸、鳥氨酸脫羧酶和精氨酸雙水解酶皆陽性。脂酶陰性。還原硝酸鹽。大多數(shù)菌株對弧菌抑制劑2,4-二氨基 -6,7-異丙基喋啶(O/129)敏感。具有腸桿菌科的共同抗原。出現(xiàn)于魚和其他水生動物和各種哺乳動物。與腹瀉有關(guān),偶爾也是人的條件致病菌。
生物危害程度:三類
致病對象:人
致病名稱:菌痢
傳播途徑:污染食物、水
分離基物:狗糞便
培養(yǎng)基編號:848
培養(yǎng)溫度:28℃
注意事項:僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用(產(chǎn)品信息以出庫為準(zhǔn))

二、分類和命名
本菌最早系1947年Ferguson和Henderson于美國密執(zhí)安州一病人糞便中分離,由于此菌具有宋內(nèi)氏志賀氏菌Ⅰ相抗原而引起注意,并標(biāo)志為C_(27)副大腸菌,屬腸桿菌科。茲后許多國家先后自人及動物糞便中分離到具有同樣特性的C_(27)菌株,并對其分類學(xué)進(jìn)行了研究。是感染性腹瀉及食物中毒的病原體,國內(nèi)外許多學(xué)者對其病原特性、生態(tài)分布、對人和動物的致病作用以及微生物學(xué)檢測等方面進(jìn)行了研究。從動物糞便中檢出類志賀鄰單胞菌的事實,概述本菌的研究進(jìn)展。

三、食物中毒
類志賀鄰單胞菌在水、魚類、多種哺乳動物及人類腸道中發(fā)現(xiàn),能引起人的腹瀉,是一種重要的腸道致病菌,此菌可引起食物中毒。
患者癥狀以腹痛、腹瀉為主,大多數(shù)腹瀉病人為水樣便,部分病人發(fā)熱達(dá)37.2~38.5℃。
治療:經(jīng)抗生素治療后2~3小時痊愈。

四、菌種的培養(yǎng)
1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種(一種)、原種(二種)和栽培種(三種)三。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種,其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩。
2、挑選具有某種能力的有用菌種,也稱種子制備,是指菌種在一定條件下,經(jīng)過擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純生產(chǎn)菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)大菌體量及合成產(chǎn)物之用。
3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備 菌種制備。
4、保存在沙土管或冷凍管中的生產(chǎn)菌種,用無菌手續(xù)挑取少許,接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上,在25℃(或較高溫度)下培養(yǎng)5~7天(或較長時間。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子(對于霉菌類孢子制備,多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基)。
5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液,接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上,于25~28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產(chǎn)上延續(xù)使用半年左右。
6、如果有些生產(chǎn)菌種不產(chǎn)孢子,如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的,則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體,作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米漿),及無機(jī)鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應(yīng)生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯,無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%~20%。

五、使用范圍
(1)合成培養(yǎng)基。合成培養(yǎng)基的各種成分完全是已知的各種化學(xué)物質(zhì)。這種培養(yǎng)基的化學(xué)成分清楚,釀酒酵母菌組成成分精確,重復(fù)性強(qiáng),而且微生物在這類培養(yǎng)基中生長較慢。如高氏一號合成培養(yǎng)基、察氏(Czapek)培養(yǎng)基等。 
(2)天然培養(yǎng)基。由天然物質(zhì)制成,如蒸熟的馬鈴薯和普通牛肉湯,前者用于培養(yǎng)霉菌,后者用于培養(yǎng)細(xì)菌。這類培養(yǎng)基的化學(xué)成分很不恒定,也難以確定,但配制方便,營養(yǎng)豐富,培養(yǎng)效果好,所以常被采用。 
(3)半合成培養(yǎng)基。在天然有機(jī)物的基礎(chǔ)上適當(dāng)加入已知成分的無機(jī)鹽類,或在合成培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加某些天然成分,如培養(yǎng)霉菌用的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基。這類培養(yǎng)基能更有效地滿足微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的需要。

六、保藏條件
斜面菌種和凍干菌種應(yīng)在 2-8°C 保存。西林瓶請置于-20°C 保存。甘油請置于-80 度。 

七、注意事項
1)凍干粉以 200ul-500ul 推薦培養(yǎng)基的液體溶解,最適接種量為 2 支 18*180 試管或者 2 支5ml 液體(請不要在錐形瓶中復(fù)蘇菌種),待菌種活化成功后才能擴(kuò)大培養(yǎng)。經(jīng)過冷凍干燥保藏,菌種處于休眠狀態(tài),復(fù)蘇培養(yǎng)時可能會延遲生長,這時需較長的培養(yǎng)時間;
2)若您收到的是已復(fù)蘇的培養(yǎng)物(非凍干菌),則可以直接用于您的實驗,或根據(jù)需要轉(zhuǎn)接培養(yǎng)如有不明白之處,請務(wù)必先咨詢我單位技術(shù)人員,避免不必要的損失;
3)微生物菌種應(yīng)保藏于低溫、清潔干燥的地方,室溫放置時間過長會導(dǎo)致菌種衰退;
4)菌種操作應(yīng)在無菌條件下進(jìn)行;轉(zhuǎn)種完畢,應(yīng)經(jīng)滅菌再做丟棄處理;
5)應(yīng)根據(jù)菌種狀況及時轉(zhuǎn)接,凍干菌種保藏時間通常為 2-25 年;
6)菌種使用過程中如出現(xiàn)雜菌污染或菌種生產(chǎn)性能下降,應(yīng)及時和微生物菌種查詢網(wǎng)聯(lián)系。
7)如若有菌種復(fù)蘇不活或者污染等情況,請在收到后 2 個月內(nèi)聯(lián)系,逾期不予受理;
8)打管操作需由專業(yè)微生物技術(shù)人員在相應(yīng)的防護(hù)設(shè)備中進(jìn)行,生物危害程度為三類的菌種應(yīng)在生物安全柜中操作,打管時凍干管應(yīng)遠(yuǎn)離面部,保護(hù)眼睛。
9)安瓿瓶開封:用浸過 75%酒精的脫脂棉擦凈安瓿管,用火焰加熱其頂端,滴少量(2-3滴)無菌水至加熱頂端使之破裂,用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端并將凍干管開口處在火焰上過一遍,并保持在火焰旁操作。
10)甘油管使用:使用本甘油菌時可以不用完全融解,在甘油菌表面蘸取少量涂板或進(jìn)行液體培養(yǎng)即可。也可以完全融解后使用,但隨著凍融次數(shù)的增加,細(xì)菌的活力會逐漸下降。

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