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放射形根瘤菌的培養(yǎng)條件與注意事項(xiàng)及打管說(shuō)明!
小楊 / 2023-11-22 09:29:50


放射形根瘤菌是Rhizobium屬的微生物,原產(chǎn)地為中國(guó)。主要用途為研究;教學(xué),具體用途為固氮。

一、菌種簡(jiǎn)介
平臺(tái)編號(hào):Bio-02238
提供形式:凍干物
拉丁屬名:Rhizobium Radiobacter
中文譯名:放射形根瘤菌
拉丁學(xué)名:Rhizobium radiobacter
原始編號(hào):C58Ti
菌株來(lái)源:←復(fù)旦大學(xué)遺傳研究所←南巴黎大學(xué)微生物所
保藏人:盛祖嘉
直接來(lái)源國(guó)家:法國(guó)
保藏時(shí)間:10/1/1980
其他保藏編號(hào):=ATCC 33970
生物危害:四類
模式菌株:非模式菌株
菌株用途:遺傳研究;攜帶溫度敏感質(zhì)粒,核酸內(nèi)切酶AtuCI
培養(yǎng)溫度:30℃
培養(yǎng)基:0032    
用途:遺傳研究;攜帶溫度敏感質(zhì)粒,核酸內(nèi)切酶AtuCI
注意事項(xiàng):僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用(產(chǎn)品信息以出庫(kù)為準(zhǔn))

二、形態(tài)特征
桿菌0.5-0.9×1.2-3.0μm。在不利的生長(zhǎng)條件下,通常為多形態(tài)。以兩根到六根周生鞭毛或以一根極生或亞極生鞭毛運(yùn)動(dòng)。不形成芽孢。革蘭氏染色陰性。在碳水化合物培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)物常伴生有豐富的胞外多糖粘液。有機(jī)化能營(yíng)養(yǎng),呼吸代謝。不生成3-酮基葡萄糖。不液化明膠或二個(gè)月內(nèi)緩慢液化。不水解酪蛋白和洋菜。在硫酸鉍洋菜培養(yǎng)基上僅有微量的硫化氫產(chǎn)生或甚至不產(chǎn)生。菌落無(wú)色或白色。能利用很多種類的碳水化合物,不形成氣體,但不利用纖維素或淀粉。能以銨鹽、硝酸鹽和大多數(shù)氨基酸作為氮源。好氧,在氧壓不足0.01大氣壓下,長(zhǎng)能茂盛的生長(zhǎng)。最適溫度25-30℃.pH生長(zhǎng)范圍5.0-8.5. 能侵入豆科植物的根毛并刺激形成根瘤。通常以多形態(tài)(類菌體)而生存于根瘤中,單個(gè)的或成小群的包圍在植物生成的膜囊內(nèi)。

三、儲(chǔ)存條件
凍干菌種和試管斜面請(qǐng)置于 6-10℃冷藏。甘油菌液請(qǐng)置于-80℃保藏。 

四、培養(yǎng)條件
BPY 瓊脂
牛肉提取物 5.0 g 蛋白胨 10.0 g 酵母提取物 5.0 g 葡萄糖 5.0 g
NaCl 5.0 g 瓊脂 15.0 g 蒸餾水 1.0 L pH 7.0

五、注意事項(xiàng)
1、菌種常規(guī)培養(yǎng)時(shí)間:細(xì)菌 1-2 天,酵母 3 天,霉菌 5-7 天,大型真菌 7-10 天。
2、菌種恢復(fù)培養(yǎng)前,建議將收到的菌種安瓿保存在 6-10°C 的環(huán)境下,某些菌種經(jīng)過(guò)冷凍干燥保存后處于休眠狀態(tài),延遲期較長(zhǎng),如在說(shuō)明建議的培養(yǎng)時(shí)間還未長(zhǎng)起來(lái),請(qǐng)繼續(xù)在相應(yīng)的環(huán)境下多培養(yǎng) 24 小時(shí)或者更長(zhǎng)時(shí)間,直至菌種培養(yǎng)完成,有的菌種需要連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長(zhǎng),一般來(lái)說(shuō)菌種培養(yǎng)穩(wěn)定后才能用于您的后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
3、初次使用時(shí)請(qǐng)嚴(yán)格按照本說(shuō)明書推薦條件和操作步驟進(jìn)行復(fù)活培養(yǎng),如使用其它類型培養(yǎng)基或培養(yǎng)條件造成菌種不活等損失,我單位不負(fù)責(zé)任。
4、恢復(fù)培養(yǎng)厭氧菌時(shí),在操作過(guò)程中應(yīng)嚴(yán)格控制厭氧條件:制作培養(yǎng)基時(shí),應(yīng)使用厭氧螺口試管,并利用高純氮?dú)馊コ嚬芎团囵B(yǎng)基中的氧氣,使用者應(yīng)保證菌種的安全存儲(chǔ)和操作,帶菌廢棄物應(yīng)高壓滅菌處理后丟棄。
5、與菌種相關(guān)的其它信息請(qǐng)參閱微生物菌種查詢網(wǎng)網(wǎng)站(www.family998.com)。

六、凍干管打管說(shuō)明書
1、安瓿瓶開封:用浸過(guò) 75%酒精的脫脂棉擦凈安瓿管,用火焰加熱其頂端,滴少量(2-3滴)無(wú)菌水至加熱頂端使之破裂(應(yīng)避免過(guò)多水蒸氣影響菌種的復(fù)蘇),用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端。
2、用無(wú)菌吸管吸取 0.3ml(建議勿超過(guò) 0.5ml)適宜的液體培養(yǎng)基(不添加瓊脂),滴入管內(nèi),輕輕振蕩,待安瓿管內(nèi)的菌體溶解呈懸浮狀,在用無(wú)菌吸管吸取全部菌懸液接在 1-2 支建議的培養(yǎng)基試管中(不超過(guò) 2 支,微生物菌種查詢網(wǎng)提供的培養(yǎng)基配方中有瓊脂,請(qǐng)務(wù)必做成試管斜面,配方中沒有瓊脂,試管中液體培養(yǎng)基不超過(guò) 5ml),并在建議的條件下靜止培養(yǎng)。
3、凍干管打開后需一次用完,不能留存。另外,安瓿管內(nèi)大部分是用牛奶做保護(hù)劑,里面菌體為少數(shù),復(fù)蘇時(shí)要全部菌懸液接在新鮮培養(yǎng)基上,否則可能造成復(fù)蘇不成功。
4、打管操作需由專業(yè)微生物技術(shù)人員在相應(yīng)的防護(hù)設(shè)備中進(jìn)行,生物危害程度為三類的菌種應(yīng)在生物安全柜中操作,打管時(shí)凍干管應(yīng)遠(yuǎn)離面部,保護(hù)眼睛。打管操作應(yīng)在燒杯或托盤上方進(jìn)行,用完凍干管應(yīng)滅菌處理后丟棄。
5、菌種復(fù)蘇時(shí),請(qǐng)務(wù)必記錄好菌種的編號(hào)和制備批號(hào),如若有菌種復(fù)蘇不活或者污染等情況,請(qǐng)?jiān)谑盏骄姾?2 個(gè)月內(nèi)聯(lián)系,逾期不予受理。

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