一、背景
SW1271人肺腺癌貼壁細(xì)胞系是一種來源于人肺腺癌的貼壁細(xì)胞系。它是一種體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞系，可用于研究肺癌的發(fā)生、發(fā)展和治療。
SW1271人肺腺癌貼壁細(xì)胞系的特點(diǎn)是具有高度的貼壁生長(zhǎng)能力，能夠在培養(yǎng)皿中形成緊密的單層細(xì)胞。此外，它還具有多藥耐藥性，即對(duì)多種化療藥物具有抵抗力。因此，SW1271細(xì)胞系在肺癌研究中具有重要的應(yīng)用價(jià)值。
二、SW1271人肺腺癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞培養(yǎng)操作
1)復(fù)蘇SW1271人肺腺癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)SW1271人肺腺癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
c、按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3)SW1271人肺腺癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。
下面T25瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
三、應(yīng)用
SW1271人肺腺癌貼壁細(xì)胞系可以用于硫化氫調(diào)控人肺腺癌細(xì)胞增殖、遷移及血管生成機(jī)制的研究：
檢測(cè)了人肺腺癌組織和相鄰癌旁組織中內(nèi)源性硫化氫合成酶的表達(dá)情況。實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)和western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,30對(duì)肺腺癌組織臨床樣本中3種硫化氫合成酶CBS、CSE和MPST的表達(dá)量顯著高于癌旁組織。其中,CBS和CSE的表達(dá)水平與肺腺癌腫瘤大小、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移程度有明顯相關(guān)性,而MPST的表達(dá)水平主要與腫瘤大小有關(guān)。體外結(jié)果同樣表明,SW1271人肺腺癌貼壁細(xì)胞系、肺腺癌A549、95D和NCI-H1395細(xì)胞中硫化氫合成酶以及H2S含量明顯高于正常肺上皮BEAS-2B細(xì)胞。
本文選擇H2S含量最多的A549細(xì)胞系和SW1271人肺腺癌貼壁細(xì)胞系進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。其次,以硫氫化鈉(NaHS)作為H2S供體,通過MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)NaHS對(duì)A549細(xì)胞的作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,低濃度的外源NaHS(0-50μM)可促進(jìn)A549細(xì)胞增殖,而2000μM濃度的NaHS則顯著促進(jìn)A549細(xì)胞凋亡。選取與H2S在體內(nèi)含量近似的50μM NaHS作為實(shí)驗(yàn)濃度刺激A549細(xì)胞24小時(shí)。
結(jié)果顯示,該濃度可顯著促進(jìn)A549細(xì)胞增殖、遷移和侵襲,加快腫瘤上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)過程。采用化學(xué)抑制劑和小干擾RNA(siRNA)基因沉默手段分別對(duì)肺腺癌中主要產(chǎn)生H2S的CBS和CSE進(jìn)行抑制。結(jié)果表明,化學(xué)抑制劑氨基氧乙酸(AOAA)和DL-炔丙基甘氨酸(PAG)都能顯著抑制細(xì)胞增殖,并將細(xì)胞周期阻滯在G2/M期,促進(jìn)細(xì)胞凋亡;同時(shí)抑制細(xì)胞劃痕愈合、transwell侵襲及EMT過程。上述結(jié)果在siRNA基因沉默實(shí)驗(yàn)中得到進(jìn)一步驗(yàn)證。
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