甲基桿菌屬的培養(yǎng)特性與保存方法及注意事項(xiàng)！
小楊 / 2024-01-08 09:26:59
甲基桿菌屬，一屬兼有甲基營養(yǎng)和甲烷營養(yǎng)特性的G-桿菌，也可用葡萄糖或其他復(fù)雜營養(yǎng)物作碳源和能源。
一、產(chǎn)品信息
規(guī)格：凍干物
拉丁屬名： Methylobacterium Sp.
拉丁名稱：Methylobacterium sp.
模式菌株：是
來源歷史：←石河子大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院
收藏時間：2020/7/9
原始編號：CLZ
原產(chǎn)國：中國
特征特性：菌落粉紅色表面光滑，革蘭氏染色陰性，短桿狀細(xì)菌，30×50μm。(G+C)mol 68.5%，全基因組完成圖(GenBank: CP047608)，16S rDNA (GenBank: MN795902)。
參考用途：可以生產(chǎn)吡咯喹啉醌、輔酶Q10、類胡蘿卜素。
生物危害程度：四類
致病對象：無
分離基物：土壤
采集地：中國山東省德州市陵城
培養(yǎng)基名稱：胰蛋白胨大豆瓊脂（TSA）(CAIQ0701)
培養(yǎng)基成分：胰蛋白胨 15.0g，大豆胨 5.0g，氯化鈉 5.0g，瓊脂 13.0 g，蒸餾水 1.0L，pH7.3±0.2。推薦使用商品化成品培養(yǎng)基。
培養(yǎng)溫度：30 ℃
需氧類型：好氧
注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準(zhǔn)）
二、知識簡介
甲基桿菌屬拉丁學(xué)名(Methylobacterium Green&Bousfield，1983) 桿狀，0.8～1.0μm×1.0～8.0μm。單個或罕見成簇，也罕見分枝或多形態(tài)。以單極毛、亞極毛或側(cè)生鞭毛運(yùn)動，有的菌沒有強(qiáng)烈的運(yùn)動。細(xì)胞常含有大的嗜蘇丹顆粒，有時有異染粒。細(xì)胞革蘭氏陰性，有的菌株為革蘭氏染色可變，代表菌株具有革蘭氏陰性細(xì)胞多層細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)和檸檬酸鹽合成特性。
三、培養(yǎng)特性
多數(shù)菌株生長緩慢，有的不能在營養(yǎng)瓊脂上生長；在甘油-蛋白胨瓊脂上的菌落直徑為1～3mm。淺粉到亮橙紅色。在甲醇-無機(jī)鹽瓊脂上菌落為更均一的淺粉色。色素是非水溶性，可能是類胡蘿卜素。在液體培養(yǎng)基中會形成粉色表面菌環(huán)或菌膜。嚴(yán)格好氧，氧化酶和接觸酶(常弱)陽性?；墚愷B(yǎng)菌，兼性甲基營養(yǎng)菌和罕有兼性甲烷營養(yǎng)菌。有的菌株可利用甲烷作為惟一碳、能源，但如在無機(jī)培養(yǎng)基上不能維持甲烷環(huán)境，該特性很易喪失。有報道代表菌株能消化C1化合物和同型檸檬酸途徑(icl-途徑)。當(dāng)在復(fù)雜的有機(jī)培養(yǎng)基上有完整的三羧酸循環(huán)。該屬成員分離于土壤、塵土、淡水、湖泥、葉表、瘤、稻谷和醫(yī)院環(huán)境。最適溫度25～30℃，包括8個種。能以一個碳為惟一碳源的革蘭氏陰性好氧菌還有10個屬。模式種：嗜有機(jī)甲基桿菌
四、保存方法
1、傳代保存法：培養(yǎng)基的濃度不宜過高，營養(yǎng)成分不宜過于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種，則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣。
2、液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時間更長，適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細(xì)菌等的保存。
3、懸液保存法：
① 蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。
② 糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長達(dá)10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進(jìn)行保存。
4、載體保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅膠保存法；④磁珠保存法；⑤麩皮保存法；⑥紙片(濾紙)保存法。
5、常用的冷凍保存法：
① 低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時使用螺旋口試管較為方便，也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時菌液加量不宜過多，有些可添加保護(hù)劑。此外，也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi)，再放入低溫冰箱內(nèi)進(jìn)行保存的。
② 干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內(nèi)，再置于冰箱內(nèi)進(jìn)行冷凍保存。
③ 液氮保存法(-196℃)：是適用范圍最廣的微生物保存法。
五、注意事項(xiàng)
1）凍干粉首次活化，干粉要全部用完，不能預(yù)留，用無菌吸管吸取 0.3ml 的培養(yǎng)液（即以上建議的培養(yǎng)基配方，不加瓊脂）或者無菌水，滴入凍干管中，輕輕振蕩至其溶解。吸取全部菌懸液，接種在培養(yǎng)基上（建議不超過 2 支平板，若接種液體培養(yǎng)基，則試管液體不超過 5ml 為宜）；
2）經(jīng)過冷凍干燥保藏，菌種處于休眠狀態(tài)，復(fù)蘇培養(yǎng)時可能會延遲生長，這時需較長的培養(yǎng)時間； 若您收到的是已復(fù)蘇的培養(yǎng)物（非凍干菌），則可以直接用于您的實(shí)驗(yàn)，或根據(jù)需要轉(zhuǎn)接培養(yǎng)如有不明白之處，請務(wù)必先咨詢我單位技術(shù)人員，避免不必要的損失；
3）微生物菌種應(yīng)保藏于低溫、清潔干燥的地方，室溫放置時間過長會導(dǎo)致菌種衰退；
4）菌種操作應(yīng)在無菌條件下進(jìn)行；轉(zhuǎn)種完畢，應(yīng)經(jīng)滅菌再做丟棄處理；
5）應(yīng)根據(jù)菌種狀況及時轉(zhuǎn)接，凍干菌種保藏時間通常為 2-25 年；
6）菌種使用過程中如出現(xiàn)雜菌污染或菌種生產(chǎn)性能下降，應(yīng)及時和
微生物菌種查詢網(wǎng)聯(lián)系。
7）如若有菌種復(fù)蘇不活或者污染等情況，請在收到菌鐘后 2 個月內(nèi)聯(lián)系，逾期不予受理；
8）打管操作需由專業(yè)微生物技術(shù)人員在相應(yīng)的防護(hù)設(shè)備中進(jìn)行，生物危害程度為三類的菌種應(yīng)在生物安全柜中操作，打管時凍干管應(yīng)遠(yuǎn)離面部，保護(hù)眼睛。
9）安瓿瓶開封：用浸過 75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量（2-3滴）無菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端并將凍干管開口處在火焰上過一遍，并保持在火焰旁操作。
10）甘油管使用：使用本甘油菌時可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或進(jìn)行液體培養(yǎng)即可。也可以完全融解后使用，但隨著凍融次數(shù)的增加，細(xì)菌的活力會逐漸下降。
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