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EFM-19人乳腺管癌細(xì)胞是一種人乳腺管癌細(xì)胞系。該細(xì)胞系在研究中常被用于了解乳腺管癌的發(fā)病機(jī)制、藥物篩選和治療效果評估等方面。

 

乳腺管癌是一種常見的惡性腫瘤，其發(fā)生和發(fā)展涉及到多種基因和環(huán)境的因素。通過研究EFM-19細(xì)胞系|人乳腺管癌細(xì)胞，科學(xué)家們可以深入了解乳腺管癌的生物學(xué)特性、細(xì)胞生長和增殖的機(jī)制，以及不同治療方法的療效和副作用。

 

為了保持細(xì)胞的活力和純度，EFM-19細(xì)胞系|人乳腺管癌細(xì)胞需要在特定的培養(yǎng)條件下進(jìn)行培養(yǎng)。這些條件包括適當(dāng)?shù)臏囟?、濕度、pH值和營養(yǎng)物質(zhì)等。同時，為了防止污染，需要在整個實(shí)驗(yàn)過程中采取嚴(yán)格的預(yù)防措施，如使用一次性耗材、定期更換培養(yǎng)液等。

 

EFM-19人乳腺管癌細(xì)胞是一種重要的研究工具，有助于深入了解乳腺管癌的發(fā)病機(jī)制和治療方法。但同時也需要嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)操作和管理，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

 

 

1)復(fù)蘇EFM-19人乳腺管癌細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。

 

將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

 

2)EFM-19人乳腺管癌細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

 

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

 

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

 

c、按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

 

d、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

 

3)EFM-19人乳腺管癌細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。

 

 

a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

 

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。

 

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

 

 

 

探討人低轉(zhuǎn)移肺大細(xì)胞癌(NL9980),人高轉(zhuǎn)移肺大細(xì)胞癌(L9981),人肺腺癌(A549),人肺鱗癌(YTMLC-9),人肺小細(xì)胞癌(NCI-H446)5種肺癌細(xì)胞株中是否存在Syk基因啟動子甲基化,探討基因啟動子甲基化對Syk的表達(dá)是否具有影響作用。

 

方法：體外培養(yǎng)人低轉(zhuǎn)移肺大細(xì)胞癌細(xì)胞株(NL9980),人高轉(zhuǎn)移肺大細(xì)胞癌細(xì)胞株(L9981),人肺腺癌細(xì)胞株(A549),人肺鱗癌細(xì)胞株(YTMLC-9),人肺小細(xì)胞癌細(xì)胞株(NCI-H446)5種肺癌細(xì)胞株以及Syk基因表達(dá)陽性對照EFM-19細(xì)胞系|人乳腺管癌細(xì)胞、Syk基因表達(dá)陰性對照人乳腺管癌細(xì)胞株(MDA-MB-435S);同時選取16例肺癌病人的腫瘤組織和相應(yīng)的正常肺組織,提取其RNA,逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,選取Syk基因特異性引物進(jìn)行擴(kuò)增,Real-time PCR觀察其表達(dá)情況。甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)(methylation-specific PCR,MSP)檢測人低轉(zhuǎn)移肺大細(xì)胞癌細(xì)胞株(NL9980),人高轉(zhuǎn)移肺大細(xì)胞癌細(xì)胞株(L9981),人肺腺癌細(xì)胞株(A549),人肺鱗癌細(xì)胞株(YTMLC-9),人肺小細(xì)胞癌細(xì)胞株(NCI-H446)5種肺癌細(xì)胞株Syk基因啟動子甲基化是否存在,以Syk基因啟動子甲基化陽性的人乳腺管癌細(xì)胞株(MDA-MB-435S)、Syk基因啟動子甲基化陰性的EFM-19細(xì)胞系|人乳腺管癌細(xì)胞為對照。以甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-氮-2’-脫氧胞苷(5-aza-CdR)處理后,檢測處理前后Syk基因的表達(dá)變化。

 

結(jié)果：以Syk表達(dá)陽性對照EFM-19人乳腺管癌細(xì)胞和陰性對照乳腺管癌細(xì)胞株(MDA-MB-435S)為參考,所培養(yǎng)的5種肺癌細(xì)胞株Syk基因表達(dá)缺失(P＜0.05)。16例肺癌病人腫瘤組織與相應(yīng)的正常肺組織相比Syk基因表達(dá)明顯減低,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。

 

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