K1735小鼠黑色素瘤細(xì)胞的特點(diǎn)與應(yīng)用及培養(yǎng)操作！
小楊 / 2024-01-19 08:58:09
一、背景
K1735小鼠黑色素瘤細(xì)胞系是一種來(lái)源于C57BL/6小鼠的黑色素瘤細(xì)胞系。它是一種常用的實(shí)驗(yàn)材料，被廣泛用于研究腫瘤生物學(xué)、藥物篩選和治療策略等領(lǐng)域。
高度增殖：K1735小鼠黑色素瘤細(xì)胞系具有快速增殖的能力，可以在體外培養(yǎng)條件下快速生長(zhǎng)。
高轉(zhuǎn)移性：K1735小鼠黑色素瘤細(xì)胞系具有高轉(zhuǎn)移性，可以穿過(guò)人工基質(zhì)并進(jìn)入周圍組織。
多藥耐藥性：K1735小鼠黑色素瘤細(xì)胞系對(duì)多種化療藥物表現(xiàn)出耐藥性，這使得它成為研究腫瘤耐藥機(jī)制的重要模型。
K1735小鼠黑色素瘤細(xì)胞系可以通過(guò)多種方法進(jìn)行培養(yǎng)和擴(kuò)增，包括貼壁培養(yǎng)、懸浮培養(yǎng)和三維培養(yǎng)等。此外，它還可以被用于制備腫瘤疫苗、基因治療和藥物篩選等實(shí)驗(yàn)。
1)復(fù)蘇K1735小鼠黑色素瘤細(xì)胞系細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)為主。
將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)K1735小鼠黑色素瘤細(xì)胞系細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
c、按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3)K1735小鼠黑色素瘤細(xì)胞系細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。
下面T25瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
四、應(yīng)用
采用四甲基偶氮唑鹽染色(MTT)法測(cè)定冬凌草甲抑制體外腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)增殖，并具有濃度和時(shí)間依賴關(guān)系，IC50為7.4～55.1μM。流式細(xì)胞測(cè)定結(jié)果證明冬凌草甲素可將K1735小鼠黑色素瘤細(xì)胞系細(xì)胞阻斷于S期和G2+M期，并能誘導(dǎo)其凋亡。冬凌草甲素誘導(dǎo)K1735小鼠黑色素瘤細(xì)胞系細(xì)胞形態(tài)分化，形成長(zhǎng)的樹(shù)突狀結(jié)構(gòu)。
此外，研究發(fā)現(xiàn)，冬凌草甲素能降低K1735小鼠黑色素瘤細(xì)胞系細(xì)胞的侵襲能力，提示冬凌草甲素抑制腫瘤細(xì)胞增殖可能是多種生物學(xué)效應(yīng)綜合的結(jié)果。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，冬凌草甲素能明顯抑制移植性H22、S180、B16瘤株的生長(zhǎng)，但對(duì)Lewis肺癌瘤株作用不明顯，其作用機(jī)理有待于進(jìn)一步研究。
本文采用乳化溶劑法制備冬凌草甲素固體脂質(zhì)納米粒(ORI-SLN)，在單因素考察的基礎(chǔ)上，采用正交試驗(yàn)法優(yōu)化處方及制備工藝。建立了冬凌草甲素固體脂質(zhì)納米粒含量測(cè)定的HPLC方法，靈敏度高，分離度好，重現(xiàn)性強(qiáng)，結(jié)果平均回收率為100.22％，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差為1.55％。用低溫高速離心法測(cè)定納米粒的包封率，結(jié)果平均包封率為91.43％，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差為1.25％。用透射電鏡觀察納米粒的形態(tài)，用激光粒度散射儀測(cè)定納米粒粒徑和zeta電位。
結(jié)果表明納米粒為均勻圓整的球體，含量為0.9642mg／ml，平均粒徑為82.5nm，多分散性指數(shù)為0.28，zeta電位為-48.2mv。此外考察了放置1，3，6個(gè)月后，納米粒的粒徑和zeta電位的變化，結(jié)果表明納米粒較為穩(wěn)定，6個(gè)月后粒徑和zeta電位才有明顯的變化。采用低溫高速離心法考察了納米粒的體外釋藥行為，并對(duì)藥物釋放曲線進(jìn)行擬合，結(jié)果表明，冬凌草甲素固體脂質(zhì)納米粒體外釋放符合Weibull分布模型，相關(guān)系數(shù)為0.9862。采用熱分析及X-射線衍射法考察冬凌草甲素固體脂質(zhì)納米粒是否形成。
本文考察自制的冬凌草甲素固體脂質(zhì)納米粒對(duì)K1735小鼠黑色素瘤細(xì)胞系細(xì)胞的作用。MTT法結(jié)果表明，冬凌草甲素固體脂質(zhì)納米粒能體外抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)增殖，并具有濃度和時(shí)間依賴關(guān)系，IC50為6.4μM。流式細(xì)胞測(cè)定結(jié)果證明冬凌草甲素固體脂質(zhì)納米?？蓪1735小鼠黑色素瘤細(xì)胞系細(xì)胞阻斷于S期和G2+M期，并能誘導(dǎo)其凋亡，并能誘導(dǎo)細(xì)胞形態(tài)分化，形成長(zhǎng)的樹(shù)突狀結(jié)構(gòu)。此外，研究發(fā)現(xiàn)，冬凌草甲素固體脂質(zhì)納米粒能降低K1735小鼠黑色素瘤細(xì)胞系細(xì)胞的侵襲能力，作用稍強(qiáng)于冬凌草甲素。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，冬凌草甲素固體脂質(zhì)納米粒能明顯抑制移植性H22、S180、B16、Lewis瘤株的生長(zhǎng)，其作用機(jī)理有待于進(jìn)一步研究。
北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司的
微生物菌種查詢網(wǎng)提供微生物菌種保藏、測(cè)序、購(gòu)買等服務(wù),是中國(guó)微生物菌種保藏中心的服務(wù)平臺(tái)，并且是集微生物菌種、菌種,ATCC菌種、細(xì)胞、培養(yǎng)基為一體的大型微生物查詢類網(wǎng)站，自設(shè)設(shè)備及技術(shù)的微生物菌種保藏中心！歡迎廣大客戶來(lái)詢！
下載附件
上一篇：菌種質(zhì)量鑒定的定義與知識(shí)及內(nèi)容與方法！
下一篇：郝克氏青霉的培養(yǎng)方法與注意事項(xiàng)及打管說(shuō)明！