人肺巨噬細(xì)胞AM的復(fù)蘇與傳代及凍存操作說(shuō)明！
小楊 / 2024-01-23 09:39:05
細(xì)胞簡(jiǎn)介
規(guī)格：1×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
細(xì)胞信息：AM
產(chǎn)品規(guī)格：T25培養(yǎng)瓶x1；1.5ml凍存管x2
細(xì)胞數(shù)量：1x10^6；1x10^6
保存溫度：37℃；-198℃
運(yùn)輸方式：常溫保溫運(yùn)輸；干冰運(yùn)輸
安全等級(jí)：1
用途限制：僅供科研用途1類
培養(yǎng)體系：DMEM高糖培養(yǎng)基+10%FBS+1%雙抗
培養(yǎng)溫度：37℃
二氧化碳濃度：5%
用途：細(xì)胞系
注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫(kù)為準(zhǔn)）
細(xì)胞復(fù)蘇操作說(shuō)明（針對(duì)凍存細(xì)胞）
實(shí)驗(yàn)儀器：超凈工作臺(tái) ，CO2 培養(yǎng)箱 ，倒置顯微鏡 ，水浴鍋 ，離心機(jī)
實(shí)驗(yàn)試劑：DMEM 培養(yǎng)基 ，胎牛血清 ，三抗
實(shí)驗(yàn)材料：T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶 ，需復(fù)蘇的細(xì)胞 ，移液槍 ，槍頭 ，離心管
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、從液氮罐中取出凍存管 ，直接浸入 37℃溫水中 ，并不時(shí)搖動(dòng)令其盡快融化。
2、從 37℃水浴中取出凍存管 ，打開(kāi)蓋子 ，移液槍吸出細(xì)胞懸液 ，加到離心管并滴加 5 倍以上完全培養(yǎng)基并混勻。
3、操作離心 ， 調(diào)至 1000 轉(zhuǎn)/分 ，時(shí)長(zhǎng) 10 分鐘
4、棄去上清液 ，重懸離心管底部細(xì)胞沉淀 ，在 T25 培養(yǎng)瓶中加入 5-6ml 完全培養(yǎng)基 ，計(jì)數(shù) ，調(diào)整細(xì)胞密度，接種培養(yǎng)瓶 ，37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。
5、次日更換一次培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。
6、注意：凍存細(xì)胞建議三管一起復(fù)蘇到一個(gè) T25 培養(yǎng)瓶中
細(xì)胞傳代操作說(shuō)明（貼壁細(xì)胞）
實(shí)驗(yàn)儀器：超凈工作臺(tái) ，CO2 培養(yǎng)箱 ，倒置顯微鏡 ，離心機(jī)
實(shí)驗(yàn)試劑：DMEM 培養(yǎng)基 ，胎牛血清 ，0.25%胰酶 ，三抗
實(shí)驗(yàn)材料：T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶 ，需傳代的細(xì)胞 ，移液槍 ，槍頭 ，離心管
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、細(xì)胞于培養(yǎng)箱中 ，愈合度達(dá)到 80% ，可進(jìn)行傳代。
2、按 T25 培養(yǎng)瓶計(jì) ，吸出完全培養(yǎng)基 ，并 PBS 緩沖液輕沖 3 遍 ，添加 0.25%含 EDTA 胰酶 2ml ，消 化 2min（具體時(shí)間視細(xì)胞而定） ，后用完全培養(yǎng)基將細(xì)胞沖洗下來(lái)。1000r/min 離心 10 min ，棄上清 收集細(xì)胞，鋪至 2 個(gè) T25 培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，各添加 7ml 完全培養(yǎng)基。
3、注意：消化時(shí)間不易過(guò)長(zhǎng)，消化前血清成分務(wù)必去除干凈，終止消化請(qǐng)用新鮮完全培養(yǎng)基，原瓶培養(yǎng)基不可繼續(xù)使用（終止消化或傳代）。
細(xì)胞傳代操作說(shuō)明（懸浮細(xì)胞）
實(shí)驗(yàn)儀器：超凈工作臺(tái) ，CO2 培養(yǎng)箱 ，倒置顯微鏡 ，離心機(jī)
實(shí)驗(yàn)試劑：DMEM 培養(yǎng)基 ，胎牛血清 ，三抗
實(shí)驗(yàn)材料：T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶 ，需傳代的細(xì)胞 ，移液槍 ，槍頭 ，離心管
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、細(xì)胞于培養(yǎng)箱中，密度達(dá)到懸浮細(xì)胞傳代標(biāo)準(zhǔn)（沉降后可鋪滿底面），可進(jìn)行傳代。
2、按 T25 培養(yǎng)瓶計(jì)，吹打均勻，吸出完全培養(yǎng)基，1000r/min 離心 10 min，棄上清收集細(xì)胞，鋪至 2 個(gè)T25 培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，各添加 7ml 完全培養(yǎng)基。
3、注意：原瓶培養(yǎng)基不可繼續(xù)使用（傳代）。
細(xì)胞凍存操作說(shuō)明
實(shí)驗(yàn)儀器：超凈工作臺(tái) ，CO2 培養(yǎng)箱 ，倒置顯微鏡 ，離心機(jī)
實(shí)驗(yàn)試劑：DMEM 培養(yǎng)基 ，胎牛血清 ，0.25%胰酶 ，三抗 ，DMSO
實(shí)驗(yàn)材料：T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶 ，需凍存的細(xì)胞 ，移液槍 ，槍頭 ，離心管 ，凍存管 ，記號(hào)筆
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、取待凍存的細(xì)胞（按 T25 計(jì) ）用 0.25EDTA 胰酶 2ml 消化 2min ，用完全培養(yǎng)基將細(xì)胞沖洗下來(lái)。1000r/min 離心 10min ，棄上清收集細(xì)胞。 如果是懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞 ，則可直接離心收集細(xì)胞。
2、加入 1ml 凍存液(90%FBS+10%DMSO )制成細(xì)胞懸液。
3、細(xì)胞懸液裝入 3 支凍存管中。
4、凍存管在 4℃下存放 30 min ，轉(zhuǎn)放-20℃ 1.5～2 h ，再轉(zhuǎn)人-70℃ 4-12 h 后即可轉(zhuǎn)移到液氮內(nèi)(- 196℃) ，并登記。
驗(yàn)收細(xì)胞注意事項(xiàng)
1、收到
人肺巨噬細(xì)胞AM細(xì)胞，請(qǐng)查看瓶子是否有破裂，培養(yǎng)基是否漏出，是否渾濁，如有請(qǐng)盡快聯(lián)系。
2、收到人肺巨噬細(xì)胞AM細(xì)胞，如包裝完好，請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞。,由于運(yùn)輸過(guò)程中的問(wèn)題，細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞有可能從瓶壁中脫落下來(lái)，顯微鏡下觀察會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞懸浮的情況，出現(xiàn)此狀態(tài)時(shí)，請(qǐng)不要打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶，應(yīng)立即將培養(yǎng)瓶置于細(xì)胞培養(yǎng)箱里靜止3-5小時(shí)左右，讓細(xì)胞先穩(wěn)定下，再于顯微鏡下觀察，此時(shí)多數(shù)細(xì)胞會(huì)重新貼附于瓶壁。如細(xì)胞仍不能貼壁，請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，如臺(tái)盼藍(lán)染色證實(shí)細(xì)胞活力正常請(qǐng)按懸浮細(xì)胞的方法處理。
3、收到人肺巨噬細(xì)胞AM細(xì)胞后，請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞，用恰當(dāng)方式處理細(xì)胞。若懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)離心收集細(xì)胞，接種到一個(gè)新的培養(yǎng)瓶中。棄掉原液，使用新鮮配制的培養(yǎng)基，使用進(jìn)口胎牛血清。剛接到細(xì)胞，若細(xì)胞不多時(shí)血清濃度可以加到15％去培養(yǎng)。若細(xì)胞迏到80%左右，血清濃度還是在10％。
4、收到
人肺巨噬細(xì)胞AM細(xì)胞時(shí)如無(wú)異常情況，請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度，如為貼壁細(xì)胞，未超過(guò)80%匯合度時(shí)，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基吸出，留下5-10ML培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)：超過(guò)80%匯合度時(shí)，請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞，吸出培養(yǎng)液，1000轉(zhuǎn)/分鐘離心3分鐘，吸出上清，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
5、將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，蓋子微微擰松。吸出的培養(yǎng)基可以保存在滅菌過(guò)的瓶子里，存放于4℃冰箱，以備不時(shí)之需。
6、24小時(shí)后，細(xì)胞形態(tài)已恢復(fù)并貼滿瓶壁，即可傳代。（貼壁細(xì)胞）將培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基倒去，加3-5ml（以能覆蓋細(xì)胞生長(zhǎng)面為準(zhǔn)）PBS或Hanks’液洗滌后棄去。加0.5-1ml 0.25%含EDTA的胰酶消化，消化時(shí)間以具體細(xì)胞為準(zhǔn)，一般1-3分鐘，不超過(guò)5分鐘?？梢苑湃?7℃培養(yǎng)箱消化。輕輕晃動(dòng)瓶壁，見(jiàn)細(xì)胞脫落下來(lái)，加入3-5ml培養(yǎng)基終止消化。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞，使之完全脫落，然后將溶液吸入離心管內(nèi)離心，1000rpm/5min。棄上清，視細(xì)胞數(shù)量決定分瓶數(shù)，一般一傳二，如細(xì)胞量多可一傳三，有些細(xì)胞不易傳得過(guò)稀，有些生長(zhǎng)較快的細(xì)胞則可以多傳幾瓶，以具體細(xì)胞和經(jīng)驗(yàn)為準(zhǔn)。（懸浮細(xì)胞）用移液管輕輕吹打瓶壁，直接將溶液吸入離心管離心即可。
7、貼壁細(xì)胞，懸浮細(xì)胞。嚴(yán)格無(wú)菌操作。換液時(shí)，換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和換新鮮的培養(yǎng)液，37℃，5%CO2培養(yǎng)。
特別提醒：原瓶中培養(yǎng)基不宜繼續(xù)使用，請(qǐng)更換新鮮培養(yǎng)基培養(yǎng)。
北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司擁有對(duì)菌種、細(xì)胞、培養(yǎng)基、配套試劑等產(chǎn)品需求者的極優(yōu)質(zhì)服務(wù)，對(duì)購(gòu)買項(xiàng)目的前期資料提供,中期合同保證,后期貨物跟蹤到最終售后的確保項(xiàng)目準(zhǔn)確到位，都有相關(guān)人士進(jìn)行維護(hù),確保您在
微生物菌種查詢網(wǎng)中獲得最優(yōu)質(zhì)服務(wù)！也正因?yàn)榇耍本┌贇W博偉生物技術(shù)有限公司與國(guó)內(nèi)外多家研制單位、生物制藥、第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)和科研院所院校、化工企業(yè)有著良好、長(zhǎng)期和穩(wěn)定的合作關(guān)系！
下載附件
上一篇：灰綠曲霉的儲(chǔ)存與培養(yǎng)及注意事項(xiàng)與打管說(shuō)明！
下一篇：UT-14人腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞的處理方法與培養(yǎng)步驟！