拒霉素鏈霉菌的培養(yǎng)方法與實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及使用范圍！
小楊 / 2024-01-30 10:26:33
拒霉素鏈霉菌，孢子絲長(zhǎng)，頂端圈卷，初旋至螺旋形。孢子卵圓形至長(zhǎng)形，表面光滑。產(chǎn)生抑制革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌、分枝桿菌的拒霉素(resistomycin)。
一、菌種簡(jiǎn)介
提供形式：凍干物
拉丁屬名：Streptomyces Resistomycificus
拉丁學(xué)名：Streptomyces resistomycificus
原始編號(hào)：ISP 5133
菌株來(lái)源：←Newcastle University
保藏人：劉志恒
直接來(lái)源國(guó)家：英國(guó)
保藏時(shí)間：11/1/1996
其他保藏編號(hào)：=
ATCC 19804 =BCRC 13755 =CBS 556.68 =DSM 40133 =JCM 4409 =NBRC 12814 =NRRL 2290
生物危害：四類(lèi)
模式菌株：模式菌株
菌株用途：模式菌株；Produces resistomycin
培養(yǎng)溫度：28℃
培養(yǎng)基：0038
分離源：土壤
用途：模式菌株；產(chǎn)生抗霉素
注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫(kù)為準(zhǔn)）
二、菌株性質(zhì)
甘油硝酸鹽瓊脂：氣絲燼灰色。基絲黃褐色至暗褐色?？扇苌丶t褐色。葡糖天冬素瓊脂：氣絲燼灰色?；z黃褐色?？扇苌攸S褐色。淀粉瓊脂：氣絲灰白色，后紅灰色。基絲淺黃色至紅褐色?？扇苌?zé)o或紅褐色。甘油蘋(píng)果酸鈣瓊脂：氣絲燼灰色至紅灰色?；z暗褐色?？扇苌鼗疑涟岛稚o(wú)機(jī)鹽淀粉瓊脂(ISP)：氣絲灰色。基絲反面灰黃色至微粉黃色，非pH指示劑。無(wú)可溶色素。甘油天冬素瓊脂(ISP)、燕麥粉瓊脂(ISP)：氣絲灰色?；z反面灰褐色至紅褐色，非pH指示劑。酵母精麥芽精瓊脂 (ISP)：氣絲灰色?；z反面紅褐色，非pH指示劑。營(yíng)養(yǎng)瓊脂氣絲無(wú)或鉛灰色?；z暗褐色。可溶色素暗褐色。葡萄糖蛋白胨瓊脂：氣絲白色?；z暗褐色?？扇苌匚⒓t色至暗褐色。馬鈴薯塊：氣絲紅白色?；z褐黑色?？扇苌匕岛稚?。明膠液化好，栗褐色素。牛奶胨化無(wú)或輕度，暗褐色素。纖維素上不生長(zhǎng)。產(chǎn)生類(lèi)黑色素。利用D-葡萄糖、L-阿拉伯糖、D-木糖、D-果糖、蔗糖、L-鼠李糖、棉子糖、肌醇、D-甘露醇。產(chǎn)生抑制革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌、分枝桿菌的拒霉素(resistomycin)。
三、培養(yǎng)方法
1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長(zhǎng)基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種(一級(jí)種)、原種(二級(jí)種)和栽培種(三級(jí)種)三級(jí)。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種,其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩。
2、挑選具有某種能力的有用菌種,也稱(chēng)種子制備,是指菌種在一定條件下,經(jīng)過(guò)擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純 菌種的制備過(guò)程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)大菌體量及合成產(chǎn)物之用。
3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備菌種制備。
4、保存在沙土管或冷凍管中的菌種,用無(wú)菌手續(xù)挑取少許,接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上,在25℃(或較高溫度)下培養(yǎng)5~7天(或較長(zhǎng)時(shí)間。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子(對(duì)于霉菌類(lèi)孢子制備,多數(shù)采用大米、小米之類(lèi)的天然培養(yǎng)基)。
5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液,接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上,于25~28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在上延續(xù)使用半年左右。
6、如果有些菌種不產(chǎn)孢子,如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的,則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體,作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長(zhǎng)、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米漿),及無(wú)機(jī)鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應(yīng)生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯,無(wú)雜菌及異常菌體。接種量一般在10%~20%。
四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
1、稱(chēng)量→溶化→調(diào)pH→過(guò)濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→無(wú)菌檢查
2、干熱滅菌:裝入待滅菌物品→升溫→恒溫→降溫→開(kāi)箱取物
3、高壓蒸汽滅菌:加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恒壓→降壓回零→排汽→取物→無(wú)菌檢查
4、過(guò)濾除菌:組裝滅菌→連接→壓濾→無(wú)菌檢查→清洗滅菌
五、使用范圍
(1)合成培養(yǎng)基。合成培養(yǎng)基的各種成分完全是已知的各種化學(xué)物質(zhì)。這種培養(yǎng)基的化學(xué)成分清楚,組成成分精確,重復(fù)性強(qiáng),而且微生物在這類(lèi)培養(yǎng)基中生長(zhǎng)較慢。如高氏一號(hào)合成培養(yǎng)基、察氏(Czapek)培養(yǎng)基等。
(2)天然培養(yǎng)基。由天然物質(zhì)制成,如蒸熟的馬鈴薯和普通牛肉湯,前者用于培養(yǎng)霉菌,后者用于培養(yǎng)細(xì)菌。這類(lèi)培養(yǎng)基的化學(xué)成分很不恒定,也難以確定,但配制方便,營(yíng)養(yǎng)豐富,培養(yǎng)效果好,所以常被采用。
(3)半合成培養(yǎng)基。在天然有機(jī)物的基礎(chǔ)上適當(dāng)加入已知成分的無(wú)機(jī)鹽類(lèi),或在合成培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加某些天然成分,如培養(yǎng)霉菌用的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基。這類(lèi)培養(yǎng)基能更有效地滿(mǎn)足微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需要。
六、注意事項(xiàng)
1、菌種恢復(fù)培養(yǎng)前，建議將收到的菌種安瓿保存在 6-10°C 的環(huán)境下，某些菌種經(jīng)過(guò)冷凍干燥保存后處于休眠狀態(tài)，延遲期較長(zhǎng)，如在說(shuō)明建議的培養(yǎng)時(shí)間還未長(zhǎng)起來(lái)，請(qǐng)繼續(xù)在相應(yīng)的環(huán)境下多培養(yǎng) 24 小時(shí)或者更長(zhǎng)時(shí)間，直至菌種培養(yǎng)完成，有的菌種需要連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長(zhǎng)，一般來(lái)說(shuō)菌種培養(yǎng)穩(wěn)定后才能用于您的后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、初次使用時(shí)請(qǐng)嚴(yán)格按照本說(shuō)明書(shū)推薦條件和操作步驟進(jìn)行復(fù)活培養(yǎng)，如使用其它類(lèi)型培養(yǎng)基或培養(yǎng)條件造成菌種不活等損失，我單位不負(fù)責(zé)任。
3、恢復(fù)培養(yǎng)厭氧菌時(shí)，在操作過(guò)程中應(yīng)嚴(yán)格控制厭氧條件：制作培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)使用厭氧螺口試管，并利用高純氮?dú)馊コ嚬芎团囵B(yǎng)基中的氧氣，使用者應(yīng)保證菌種的安全存儲(chǔ)和操作，帶菌廢棄物應(yīng)高壓滅菌處理后丟棄。
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