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Lec1（倉鼠卵巢細胞）是一種特殊的細胞系，具有上皮細胞的形態(tài)，并且適應貼壁生長。這種細胞是從脯氨酸缺陷型的CHO（中國倉鼠卵巢）克隆Pro-5中挑選出來的能抗麥芽凝集素的突變株。由于Lec1缺乏稱為GlcNAc-T1的糖基轉(zhuǎn)移酶，因此N-連接的碳水化合物被阻斷在Man5GlcNAc2Asn中間體。這一特性使得Lec1細胞在研究N-連接糖基化改變對內(nèi)源糖蛋白或病毒感染、以克隆DNA轉(zhuǎn)染產(chǎn)生的糖蛋白的功能和區(qū)隔化的影響方面非常有用。

 

在細胞培養(yǎng)方面，Lec1（倉鼠卵巢細胞）通常需要在特定的培養(yǎng)體系和條件下進行傳代和培養(yǎng)。例如，它們可以在MEMα培養(yǎng)基中添加10%的FBS（胎牛血清）和1%的P/S（青霉素/鏈霉素）進行培養(yǎng)。對于傳代，一般采用1:2的比例進行傳代。此外，這些細胞也可以進行凍存和復蘇，但需要使用適當?shù)膬龃鏃l件和保存液，以確保細胞的活力和穩(wěn)定性。

 

Lec1（倉鼠卵巢細胞）是一種重要的科研工具，特別適用于研究N-連接糖基化對細胞功能和病毒感染等方面的影響。通過使用這種細胞系，科學家們可以深入了解糖基化過程在生物體內(nèi)的復雜作用，并為相關(guān)疾病的預防和治療提供新的思路和方法。

 

 

1)復蘇Lec1（倉鼠卵巢細胞）：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。

 

將含有1 mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

 

2)Lec1（倉鼠卵巢細胞）傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

 

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

 

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

 

c、按6-8 mL/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

 

d、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

 

3)Lec1（倉鼠卵巢細胞）凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。

 

 

a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。

 

b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。

 

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

 

 

 

探討金雀異黃素(genistein GEN)聯(lián)合阿霉素(adriamycin ADR)對卵巢癌(Ovarian cancer)A2780細胞增殖和荷瘤裸鼠腫瘤生長的影響及其機制。

 

方法：把卵巢癌A2780細胞和Lec1（倉鼠卵巢細胞）制成細胞懸液后,接種于SD品系裸鼠右后肢跟部皮下,制成卵巢癌裸鼠模型。實驗分成4組進行:生理鹽水組(裸鼠腹腔注射生理鹽水0.2ml),金雀異黃素組(裸鼠腹腔注射c-myc GEN30mg/kg),阿霉素組(裸鼠腹腔注射ADR 20mg/m2),金雀異黃素聯(lián)合阿霉素組(裸鼠腹腔注射c-myc GEN30mg/kg聯(lián)合ADR 20mg/m2)。4周后處死裸鼠,剝?nèi)⊥暾哪[瘤組織稱重,并計算各組腫瘤抑制率。免疫組織化學方法檢測c-myc在腫瘤細胞中的表達,免疫蛋白印記方法檢測c-myc在腫瘤細胞中的表達量,四甲基噻唑藍(Methy thiazoly1 tetrazolium,MTT)檢測各組細胞的增殖能力,細胞黏附實驗、細胞遷移(transwell)實驗檢測各組細胞的侵襲能力,流式細胞術(shù)檢測細胞周期和細胞凋亡。

 

結(jié)果：腫瘤抑制率結(jié)果分析,與生理鹽水組相比,金雀異黃素聯(lián)合阿霉素治療組、阿霉素組、金雀異黃素組,抑瘤率分別為(44.81±5.74)%,(38.45±4.25)%、(32.26±2.21)%差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。免疫組織化學結(jié)果金雀異黃素聯(lián)合阿霉素組、阿霉素組、金雀異黃素組均對c-myc表達,Western Blot檢測顯示與生理鹽水組相比,聯(lián)合治療組、阿霉素組、金雀異黃素組c-myc表達量明顯上調(diào)(P<0.05)。MTT方法檢測顯示空白對照組、GEN組、ADR組、GEN和ADR組,細胞活力分別為(100.0±0.0)%,(56.4±4.25)%、(59.26±2.21)%、(40.33±1.23)%。細胞粘附力檢測GEN聯(lián)合ADR組、ADR組、GEN組可降低A2780細胞的粘附力(P<0.05),而對Lec1（倉鼠卵巢細胞）細胞無影響。細胞遷移力實驗檢測顯示GEN聯(lián)合ADR組、ADR組、GEN組,細胞遷移率明顯低于空白對照組(P<0.05)。流式細胞儀檢測顯示GEN聯(lián)合ADR組、ADR組、GEN組,G0/G1期細胞數(shù)明顯升高(P<0.05),S期細胞數(shù)明顯降低(P<0.05),GEN聯(lián)合ADR組、ADR組、GEN組細胞凋亡率明顯高于空白對照組(P<0.05),且對Lec1（倉鼠卵巢細胞）細胞無促進細胞凋亡作用。

 

 

1、GEN聯(lián)合ADR可抑制裸鼠體內(nèi)卵巢癌細胞及抑制體外卵巢A2780細胞的增殖、細胞的侵襲能力,促進腫瘤細胞的凋亡，但對Lec1（倉鼠卵巢細胞）無效。

 

2、GEN聯(lián)合ADR抑制卵巢癌A2780細胞的增殖、侵襲能力,促進細胞凋亡其機制為降低腫瘤細胞對c-myc的表達,影響c-myc蛋白參與調(diào)控的癌細胞增殖和轉(zhuǎn)移過程。

 

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