草木犀劍菌的培養(yǎng)方法與注意事項及打管說明！
小楊 / 2024-02-28 09:03:25
草木犀劍菌是Ensifer屬的微生物，原產(chǎn)地為中國。α變形菌綱的革蘭氏陰性桿菌。主要用途為分類學(xué)研究，具體用途為模式菌株。
一、菌種簡介
規(guī)格：凍干粉
拉丁屬名：Ensifer Meliloti
拉丁學(xué)名：Ensifer meliloti
原始編號：CCBAU 71042
菌株來源：←中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
保藏人：隋新華
直接來源國家：中國
保藏時間：4/4/2003
生物危害：四類
模式菌株：模式菌株
菌株用途：模式菌株
培養(yǎng)溫度：28℃
培養(yǎng)基：0009
分離源：雞眼草屬根瘤
采集地點：陜西
采集國家：中國
用途：模式菌株
注意事項：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準(zhǔn)）
二、保藏條件
斜面菌種和凍干菌種應(yīng)在 2-8°C 保存。西林瓶請放-20°C 保存。甘油請置于-80°C。
三、培養(yǎng)基
根瘤菌培養(yǎng)基
酵母提取物 1.0g 甘露醇 10.0g 土壤浸取液 200.0g
瓊脂 15.0g 蒸餾水 1.0 L PH 7.2
四、注意事項
1、菌種恢復(fù)培養(yǎng)前，建議將收到的菌種安瓿保存在 6-10°C 的環(huán)境下，某些菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后處于休眠狀態(tài)，延遲期較長，如在說明建議的培養(yǎng)時間還未長起來，請繼續(xù)在相應(yīng)的環(huán)境下多培養(yǎng) 24 小時或者更長時間，直至菌種培養(yǎng)完成，有的菌種需要連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長，一般來說菌種培養(yǎng)穩(wěn)定后才能用于您的后續(xù)實驗。
2、初次使用時請嚴(yán)格按照本說明書推薦條件和操作步驟進(jìn)行復(fù)活培養(yǎng)，如使用其它類型培養(yǎng)基或培養(yǎng)條件造成菌種不活等損失，我單位不負(fù)責(zé)任。
3、恢復(fù)培養(yǎng)厭氧菌時，在操作過程中應(yīng)嚴(yán)格控制厭氧條件：制作培養(yǎng)基時，應(yīng)使用厭氧螺口試管，并利用高純氮氣去除試管和培養(yǎng)基中的氧氣，使用者應(yīng)保證菌種的安全存儲和操作，帶菌廢棄物應(yīng)高壓滅菌處理后丟棄。
五、凍干管打管說明書
1、安瓿瓶開封：用浸過 75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量（2-3 滴）無菌水至加熱頂端使之破裂（應(yīng)避免過多水蒸氣影響菌種的復(fù)蘇），用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端。
2、用無菌吸管吸取 0.3ml（建議勿超過 0.5ml）適宜的液體培養(yǎng)基(不添加瓊脂)，滴入管內(nèi)，輕輕振蕩，待安瓿管內(nèi)的菌體溶解呈懸浮狀，在用無菌吸管吸取全部菌懸液接在 1-2 支建議的培養(yǎng)基試管中（不超過 2支，單位所提供的培養(yǎng)基配方中有瓊脂，請務(wù)必做成試管斜面，配方中沒有瓊脂，試管中液體培養(yǎng)基不超過 5ml），并在建議的條件下靜止培養(yǎng)。凍干管打開后需一次用完，不能留存。
3、另外，安瓿管內(nèi)大部分是用牛奶做保護(hù)劑，里面菌體為少數(shù)，復(fù)蘇時要全部菌懸液接在新鮮培養(yǎng)基上，否則可能造成復(fù)蘇不成功。打管操作需由專業(yè)微生物技術(shù)人員在相應(yīng)的防護(hù)設(shè)備中進(jìn)行，生物危害程度為三類的菌種應(yīng)在生物安全柜中操作，打管時凍干管應(yīng)遠(yuǎn)離面部，保護(hù)眼睛。
4、打管操作應(yīng)在燒杯或托盤上方進(jìn)行，用完凍干管應(yīng)滅菌處理后丟棄。菌種復(fù)蘇時，請務(wù)必記錄好菌種的編號和制備批號，否則不予售后如若有菌種復(fù)蘇不活或者污染等情況，請在收到菌種后 2 個月內(nèi)聯(lián)系，逾期不予受理。
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