MCA-205小鼠纖維肉瘤細(xì)胞的應(yīng)用及培養(yǎng)操作！
小楊 / 2024-03-02 09:04:37
一、背景
MCA-205小鼠纖維肉瘤細(xì)胞是一種弱免疫原性的細(xì)胞系，由纖維肉瘤在C57BL/6小鼠中誘導(dǎo)產(chǎn)生。這種細(xì)胞系已被廣泛用于誘導(dǎo)腫瘤反應(yīng)性T淋巴細(xì)胞的過繼免疫療法研究中。同時(shí)，MCA-205細(xì)胞也被用作刺激劑，以研究細(xì)胞因子的表達(dá)。此外，該細(xì)胞系還是研究腫瘤細(xì)胞免疫反應(yīng)和支持靶向癌癥免疫療法開發(fā)的絕佳模型。
1)復(fù)蘇MCA-205小鼠纖維肉瘤細(xì)胞細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)MCA-205小鼠纖維肉瘤細(xì)胞細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
c、按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3)MCA-205小鼠纖維肉瘤細(xì)胞細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。
下面T25瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
三、應(yīng)用
Kif20a在小鼠纖維肉瘤中的作用研究為明確Kif20a在小鼠纖維肉瘤中的作用,我們首先檢測(cè)了其在小鼠纖維肉瘤細(xì)胞系WEHI164、MCA101、MCA207、MCA-205小鼠纖維肉瘤細(xì)胞系中的表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)Kif20a高表達(dá)。通過轉(zhuǎn)染成功構(gòu)建出Kif20a敲低的小鼠纖維肉瘤細(xì)胞系,并以此為研究對(duì)象,檢測(cè)其細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲、遷移的變化,并用Kif20a敲低的小鼠纖維肉瘤細(xì)胞系構(gòu)建荷瘤鼠,觀察其腫瘤大小及腫瘤轉(zhuǎn)移情況,結(jié)果顯示,Kif20a下調(diào)后,小鼠纖維肉瘤細(xì)胞的活力降低,細(xì)胞周期阻滯在G2/M期,克隆形成能力明顯降低,凋亡增加,侵襲、遷移能力降低,腫瘤減小,腫瘤組織Ki67的表達(dá)降低,提示在小鼠纖維肉瘤中,Kif20a下調(diào)仍能抑制細(xì)胞增殖、遷移和侵襲,促進(jìn)細(xì)胞凋亡,抑制腫瘤生長(zhǎng)。
綜上所述,本研究顯示KIF20A是軟組織肉瘤生物調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的核心基因,KIF20A在軟組織肉瘤中高表達(dá)與軟組織肉瘤的預(yù)后密切相關(guān)。在纖維肉瘤細(xì)胞系中,轉(zhuǎn)錄組測(cè)序發(fā)現(xiàn)下調(diào)KIF20A,多種與生物學(xué)進(jìn)程及信號(hào)通路相關(guān)的基因發(fā)生變化。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),下調(diào)KIF20A后,PI3K-AKT活性受到抑制,其下游NF-κB、細(xì)胞周期、凋亡等信號(hào)通路也發(fā)生改變,從而抑制了腫瘤的增殖、遷移、侵襲及轉(zhuǎn)移,促進(jìn)了腫瘤的凋亡。本研究明確了KIF20A在小鼠纖維肉瘤細(xì)胞系WEHI164、MCA101、MCA207、MCA-205小鼠纖維肉瘤細(xì)胞系中的表達(dá)情況,探討了其在纖維肉瘤中的作用及相關(guān)機(jī)制,提示KIF20A是治療纖維肉瘤潛在的分子標(biāo)志物和治療靶點(diǎn),為纖維肉瘤的治療提供新的思路。
北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司的
微生物菌種查詢網(wǎng)提供微生物菌種保藏、測(cè)序、購買等服務(wù),是中國(guó)微生物菌種保藏中心的服務(wù)平臺(tái)，并且是集微生物菌種、菌種,ATCC菌種、細(xì)胞、培養(yǎng)基為一體的大型微生物查詢類網(wǎng)站，自設(shè)設(shè)備及技術(shù)的微生物菌種保藏中心！歡迎廣大客戶來詢！
下載附件
上一篇：細(xì)胞凍存與復(fù)蘇的實(shí)驗(yàn)原理與步驟及注意事項(xiàng)！
下一篇：人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)及收貨注意事項(xiàng)！