HKC人腎小管上皮細(xì)胞的性質(zhì)與用途及生產(chǎn)工藝！
小楊 / 2024-03-22 09:02:24
一、知識(shí)概述
人腎小管上皮細(xì)胞源于正常腎的近曲小管細(xì)胞，通過(guò)導(dǎo)入HPV-16E6/E7基因而獲得永生化。將含有HPV-16E6/E7基因的重組的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體pLXSN16E6/E7轉(zhuǎn)染外生包裝細(xì)胞Psi-2，Psi-2細(xì)胞產(chǎn)生的病毒再去感染兼嗜性包裝細(xì)胞系PA317，將PA317產(chǎn)生的病毒顆粒導(dǎo)入正常的腎皮質(zhì)近曲小管細(xì)胞。盡管pLXSN16E6/E7中含有新霉素抗性，但未用G418篩選轉(zhuǎn)導(dǎo)克隆。Southern和FISH分析顯示HK-2細(xì)胞來(lái)源于單克隆。PCR檢測(cè)證實(shí)HK-2細(xì)胞基因組中含有E6/E7基因。
二、產(chǎn)品信息
規(guī)格：1×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
細(xì)胞信息：HKC
種屬：人
年齡（性別）：
組織來(lái)源：
生長(zhǎng)特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：多角形
背景描述：HKC細(xì)胞常用于腎小管上皮細(xì)胞代謝方面的研究。
生長(zhǎng)培養(yǎng)基：DMEM/F12＋5% FBS＋1% P/S
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃
用途：研究
注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫(kù)為準(zhǔn)）
三、產(chǎn)品的運(yùn)輸和保存
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶(hù)協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿(mǎn)干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿(mǎn)完全培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
四、產(chǎn)品使用
1)本產(chǎn)品僅能用于科研
2)本產(chǎn)品未通過(guò)直接用于活體動(dòng)物和人的審核
3)本產(chǎn)品未通過(guò)用于活體診斷的審核
五、細(xì)胞接受后的處理方法
1）收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查是否漏液，如果漏液，請(qǐng)拍照片發(fā)給我們。
2）請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，去掉封口膜并將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)約 2-4 h，讓細(xì)胞適應(yīng)穩(wěn)定下新環(huán)境。
3）請(qǐng)將培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)液吸取到 2 個(gè) 50 ml 離心管中，1000 rpm 離心 5 分鐘，收集懸浮的細(xì)胞。原瓶中留取 5-10 ml 培養(yǎng)基，用于細(xì)胞的繼續(xù)培養(yǎng)。收集的懸浮細(xì)胞可以置于新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。
4）如果細(xì)胞長(zhǎng)滿(mǎn)（90%以上）請(qǐng)及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代，傳代時(shí)請(qǐng)使用新鮮培養(yǎng)基逐步替代瓶中自帶的培養(yǎng)基。培養(yǎng)瓶中留一部分原裝培養(yǎng)液，再補(bǔ)加自己新配的培養(yǎng)基至適當(dāng)容積，例如 4-10 ml，讓細(xì)胞逐步適應(yīng)新的培養(yǎng)基環(huán)境。
5）接到細(xì)胞次日，請(qǐng)檢查細(xì)胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系。如果細(xì)胞發(fā)生污染，或者細(xì)胞無(wú)法傳代成功，請(qǐng)務(wù)必在7日內(nèi)給予反饋！
六、細(xì)胞培養(yǎng)步驟
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1 ml 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4 mL 培養(yǎng)基混合均勻。在 1000 RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2 mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入 10 cm 皿中，加入約 8 ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2、加 1ml 消化液（0.25% Trypsin-0.53 mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3、按 6-8 ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000 RPM 條件下離心4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2 mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4、將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8 ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類(lèi)；
1、細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入 1 ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2、4 min 1000 rpm 離心去掉上清。加 1 ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1 ml 細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
3、將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
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