保藏中心細(xì)胞庫建議使用背景資料上指定的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞系,部分常用的培養(yǎng)基配制方法羅列如下,培養(yǎng)基過濾除菌后應(yīng)檢測無菌狀況,然后補加血清和雙抗,雙抗的使用濃度一般是終濃度100單位/mL培養(yǎng)基。當(dāng)然,部分細(xì)胞可用其它培養(yǎng)基替代,每個實驗室都有自己傳統(tǒng)的培養(yǎng)基配制方法,我們提供的配制方法僅供參考。
1.消化液的配制:
①胰酶(1:250) 2.5 克 ②EDTA-Na 0.3克 ③NaCl 8.0克 ④KCl 0.4克 ⑤Glucose 1.0克 ⑥Phenol Red 0.005克 ⑦Water 1000 mL 磁力攪拌2-3小時,調(diào)pH 7.8-8.0,過濾除菌。 2.MEM medium (1L) ① MEM 1瓶(代) Non-essential amino acids 10 mL 丙酮酸鈉 0.11克 water 800 mL
磁力攪拌2-3小時 ② NaHCO3 2.0克 water 200 mL 磁力攪拌1小時 ①+②, 調(diào)pH 7.0-7.2,過濾除菌。
3. RPMI 1640 medium (1L) ① RPMI 1640 1瓶(代) L-Glutamine 0.11克 丙酮酸鈉 0.11克 water 800 mL 磁力攪拌2-3小時 ② NaHCO3 2.0克 water 200 mL 磁力攪拌1小時 ①+②, 調(diào)pH 7.0-7.2,過濾除菌。
4. DMEM medium (1L) ① DMEM 1瓶(代) Glucose 3.5克 water 800 mL 磁力攪拌2-3小時 ② NaHCO3 2.0克 water 200 mL 磁力攪拌1小時 ①+②, 調(diào)pH 7.0-7.2,過濾除菌。
5. Grace`s Medium Grace`s Insect Cell Culture Medium 1瓶(代) Yeast extract 3.3克 Lactal albumen hydrolysate 3.3克 NaHCO3 0.35克 water 1000 mL 在15-30℃磁力攪拌4-5小時 用2N KOH 調(diào)pH至6.5-6.6,過濾除菌。
6.DMEM/F12 Medium ① DMEM/F12 1瓶(代) L-Glutamine 0.2克 丙酮酸鈉 0.11克 water 800 mL 磁力攪拌2-3小時 ② NaHCO3 2.0克 water 200 mL 磁力攪拌1小時 ①+②, 調(diào)pH 7.0-7.2,過濾除菌。
7. 部分常用的微生物檢測培養(yǎng)基
7.1 Sabouraud dexrosebroth (Difco 0382-01) SDB Sabouraud powder 3.00g Distilled water 100ml pH 5.6 Dispense 3ml aliquots of broth into each of 33 test tubes (12×100mm), and cap each tube loosely.
7.2 Brain heart infusion broth BHI (Difco 0037-01-6) Broain heart infusion powder 3.70g Distilled water 100ml pH 7.4 Dispense 33 test tubes (12×100mm), and cap each tube loosely.
7.3 Thioglycollate medium THIO (Difco 0256-01) Thioglycollate powder 2.98g Distilled water 100ml pH 7.1 Dispense 33 test tubes (12×100mm), and cap each tube loosely.
7.4 Trypticase soy broth TSB (BBL 01-162) Trypticase soy broth powder 3.00 g Distilled water 100ml pH 7.3 Dispense 33 test tubes (12×100mm), and cap each tube loosely. All medium are sterilized in an autoclave for 20 min at 15 lbc pressure (121℃) on slow exhaust. Store at room temperature or 4℃
8,包被用多聚賴氨酸配制 取25mg溶于50ml H2O中,過濾除菌,再取4ml 稀釋至50ml H2O中 成工作液,4度保存。