血漿凝血酶原時(shí)間測(cè)定（PT）標(biāo)準(zhǔn)知識(shí)解析及操作規(guī)程！
小楊 / 2024-06-27 08:48:27
一、項(xiàng)目名稱：
血漿凝血酶原時(shí)間測(cè)定（prothrombin time ，PT）
二、檢驗(yàn)方法名稱：
凝結(jié)法
三、方法學(xué)原理：
在確定量的血漿樣本經(jīng)過(guò)一定時(shí)間的加溫后，加入試劑。加入試劑后，采用波長(zhǎng)為660nm的光照射樣本。凝血過(guò)程（纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白）中血的渾濁度可以通過(guò)測(cè)量散射光光強(qiáng)度的改變來(lái)測(cè)定。從散射光光強(qiáng)度的測(cè)定，可以做出凝血曲線，通過(guò)Percentage Detection Method法求得凝血時(shí)間。
四、方法學(xué)溯源：
凝血酶原時(shí)間（PT）測(cè)定是Quick于1935年創(chuàng)立的。在受檢血漿中加入過(guò)量的組織凝血活酶（人腦、兔腦、胎盤及肺組織等制品的浸出液）和鈣離子，使凝血酶原變?yōu)槟?，后者使纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白。觀察血漿凝固所需要的時(shí)間即凝血酶原時(shí)間。其凝固時(shí)間取決于凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅴ、Ⅹ、Ⅰ的水平。該試驗(yàn)是反映外源凝血系統(tǒng)最常用的篩選試驗(yàn)。
五、儀器：
（一）型號(hào)：Sysmex CA—1500自動(dòng)血液凝血分析儀
（二）分析和計(jì)算參數(shù)：
1、處理量：約120個(gè)測(cè)試/小時(shí)
2、所需樣本量：50μl
3、檢驗(yàn)時(shí)間：在最長(zhǎng)檢驗(yàn)時(shí)間之內(nèi)測(cè)出結(jié)果，典型最長(zhǎng)檢驗(yàn)時(shí)間：100秒
4、重復(fù)性：CV≤2%
5、計(jì)算參數(shù)：凝血酶原活動(dòng)度（PT%）
凝血酶原比值（PT R）
國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化比值（INR）
六、試劑及配套品：
（一）試劑：
1、凝血活酶含鈣試劑（Thromborel® S）
（1）商標(biāo)：德靈（DADE BEHRING）
（2）包裝規(guī)格：Pack for 10×4ml
（3）代碼：No.OUHP 29 , or
（4）參數(shù)：ISI（國(guó)際敏感度指數(shù)）=0.97
（5）成分：
1）Thromborel® S Reagent :
a.凍干人胎盤促凝血酶原激酶（lyophilized human placental thromboplastin）
b.氯化鈣 (calcium chloride)
c.穩(wěn)定劑 (stabilizers)
2) 防腐劑（Preservatives）:
a.慶大霉素（Gentamicin）(0.1g/L)
b.5-氯-2-甲基-4-異噻唑啉-3-酮和2-甲基-4-異噻唑啉-3-酮（5-chloro-2-methyl-4-isothiazol-3-one and 2-methyl-4-isothiazol-3-one）（最大量 20mg/L）
2、佛羅那巴比妥緩沖液（Dade® Owren'S Veronal Buffer）
（1）商標(biāo)：德靈（DADE BEHRING）
（2）包裝規(guī)格：Pack for 10×10ml
（3）代碼：B4234-25
（4）成分：
1）2.84×10²M的巴比妥鈉 (sodium barbital)
2）1.25×10¹M的氯化鈉 (sodium chloride)
3) PH 7.35±0.1
3、清洗液（Cleaning）
2%次氯酸鈉溶液（自配）
（二）配套品：
1、標(biāo)準(zhǔn)血漿（Standard Human Plasma）
(1) 商標(biāo)：德靈（DADE BEHRING）
(2) 代碼：No. ORKL
2、校準(zhǔn)質(zhì)控血漿（Ci-Trol®）
(1) 商標(biāo)：德靈（DADE BEHRING）
(2) 代碼：Level 1, B4244-10
Level 2, B4244-20
Level 3, B4244-30
3、質(zhì)控血漿（Control Plasma）
(1) 商標(biāo)：太平洋（Pacific Hemostasis）
(2) 代碼及規(guī)格：Level 1 (Normal), 100595 10×1ml
Level 2 (Abnormal), 100596 10×1ml
Level 3 (Abnormal), 100597 10×1ml
七、操作步驟：
（一） 開機(jī)：開機(jī)前，先打開連機(jī)的打印機(jī)。按下機(jī)器右邊的POWER按鈕。開機(jī)后機(jī)器進(jìn)行自檢，當(dāng)屏幕上邊顯示“Ready”時(shí)可以進(jìn)行試驗(yàn)。
（二）洗針：在主屏幕上選“Rinse Probe”，然后按下“Execute”進(jìn)行洗針。
（三）準(zhǔn)備試劑：按照儀器試劑位置程序要求，把每一項(xiàng)的試劑準(zhǔn)備好，放在相應(yīng)的位置。（注：PT試劑的配制：在凍干粉試劑瓶中加入蒸餾水4ml，于37ºC溫箱或水浴箱中放置30min）。
（四）準(zhǔn)備標(biāo)本：將室內(nèi)質(zhì)控和離心好的樣本放在相應(yīng)的樣本架上（一個(gè)架子可放10個(gè)樣本），準(zhǔn)備好放在進(jìn)樣器上。
（五）準(zhǔn)備反應(yīng)杯：打開儀器上蓋裝反應(yīng)杯的蓋子，查看反應(yīng)杯是否夠量，需及時(shí)添加。
（六）輸入試驗(yàn)項(xiàng)目：按下主菜單上的“Work List”鍵，在試驗(yàn)項(xiàng)目鍵點(diǎn)擊PT，使PT鍵由“—”變?yōu)?ldquo;O”。如有需要按屏幕下的“Repeat”鍵，儀器會(huì)自動(dòng)重復(fù)十個(gè)樣本的檢測(cè)項(xiàng)目與第一個(gè)樣本相同。屏幕右邊的光標(biāo)移動(dòng)鍵，按下“NEXT”表示翻到下一個(gè)界面，按“↑”表示向上移動(dòng)光標(biāo)，“←或→”表示下一個(gè)界面試驗(yàn)項(xiàng)目。
（七）輸入樣本號(hào)：按下“ID No.Entry”，按順序輸入樣本的序號(hào)或病人的病歷號(hào)。
（八）開始檢測(cè)：待一切準(zhǔn)備工作就緒，按下儀器右上角“START”鍵，儀器開始工作。
（九）查看結(jié)果：返回主屏幕，檢測(cè)的項(xiàng)目如果由“◎”變?yōu)?ldquo;●”表明此試驗(yàn)已經(jīng)完成，然后按下“Stored Date”（儲(chǔ)存結(jié)果）鍵，屏幕會(huì)換到結(jié)果顯示界面，檢測(cè)的結(jié)果會(huì)自動(dòng)傳輸?shù)酱水嬅?，如果查看反?yīng)趨勢(shì)圖，按下邊第一個(gè)菜單“Graph”，查看凝集趨勢(shì)、吸光度、結(jié)果等。
（十）洗針：當(dāng)做完一批標(biāo)本以后，需要洗針，按下“Rinse Probe”，然后按下“Execute”進(jìn)行洗針。
（十一）關(guān)機(jī)：回到主屏幕下，在洗完針以后方可關(guān)機(jī)，切斷電源，關(guān)閉打印機(jī)。
八、參考范圍：PT（sec）：11—14 s
PT% ：80%—120%
PTR ：1±0.15
INR ：0.8—1.5
九、臨床意義：
（一）PT延長(zhǎng)
1、外源凝血系統(tǒng)的因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ和纖維蛋白原減低，如先天性某因子缺乏癥和低（無(wú)）纖維蛋白原血癥，但均很少見，獲得性的見于DIC、原發(fā)性纖溶、維生素K缺乏癥、肝臟疾病等。
2、血循環(huán)中抗凝物質(zhì)增加，如肝素或FDP增多等。
（二）PT縮短 口服避孕藥、高凝狀態(tài)和血栓性疾病等。
（三）用于香豆素類等口服抗凝劑的監(jiān)控
1、一般認(rèn)為以維持PT值在參考值的2倍左右（1.3—2.5倍）即25—30s，或PT R為1.3—1.5（最大不超過(guò)2）為宜。
2、PT%應(yīng)控制在40%以上，減低到40%有出血傾向。
3、不同情況下口服抗凝藥治療的最佳抗凝強(qiáng)度時(shí)INR的范圍：
（1）術(shù)前兩周或術(shù)中口服抗凝藥，INR為1.5—3.0；
（2）原發(fā)或繼發(fā)靜脈血栓的預(yù)防，INR為2—3；
（3）活動(dòng)性靜脈血栓、肺梗塞、復(fù)發(fā)性靜脈血栓的預(yù)防，INR為2—4；
（4）動(dòng)脈血栓栓塞的預(yù)防，心臟換瓣術(shù)后，INR為3—4.5。
十、病人準(zhǔn)備和標(biāo)本要求：
（一）采血時(shí)，首先應(yīng)該確認(rèn)病人姓名，并且將姓名和編號(hào)寫在真空采血管的標(biāo)簽處。
（二）盡可能保證每次采血都在同樣的條件下進(jìn)行，即病人處于休息狀態(tài)，并且在早餐前采血。
（三）凝血實(shí)驗(yàn)標(biāo)本最好不與其它實(shí)驗(yàn)一起采集，否則由于標(biāo)本的分配、分裝等而使血液停留在針管的時(shí)間延長(zhǎng)。
（二）取血時(shí)，病人應(yīng)松弛，環(huán)境溫暖，防止靜脈痙攣，止血帶的壓力應(yīng)盡可能小，取血速度平穩(wěn)順利，防止產(chǎn)生氣泡。
（三）用定量為3毫升的一次性枸櫞酸鈉（0.11mol/L）真空采血管采血至指定刻度，取血完畢立即輕輕顛倒混均混合均勻，不要?jiǎng)×艺鹗帲⒈苊猱a(chǎn)生氣泡。
（四）及時(shí)離心，3000轉(zhuǎn)/分離心標(biāo)本10分鐘，以除去血小板。
（五）務(wù)必于采血后2小時(shí)內(nèi)測(cè)定完畢,如不能完成試驗(yàn)，冷凍貯存少量血漿（0.5—1ml）（最好在-70℃，或者當(dāng)貯存時(shí)間較短時(shí)，可以置于-20℃條件下），在實(shí)驗(yàn)前將血漿于37℃下快速融化。血漿用塑料試管存放，并用塑料吸管移取標(biāo)本。
十一、操作注意事項(xiàng)：
許多的實(shí)驗(yàn)誤差都來(lái)源于技術(shù)的錯(cuò)誤。在實(shí)驗(yàn)技術(shù)、試劑、溫度及PH值上很小的變化都會(huì)導(dǎo)致試驗(yàn)結(jié)果明顯的變化。孵育時(shí)間與溫度是凝血酶原時(shí)間測(cè)定時(shí)應(yīng)嚴(yán)格控制的參數(shù)。血漿絕不能在37°C下放置10min。
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