你還在為菌落計數所困擾嗎？技巧來了，趕緊收藏吧！
小楊 / 2024-11-08 09:09:40
百歐博偉生物：菌落計數反映食品衛(wèi)生質量，常用平板菌落計數法。確保結果有效需做空白對照、檢測環(huán)境、滅菌處理。提高準確性需樣品消毒、選合適稀釋度。培養(yǎng)后倒置平板防菌落蔓延，異?，F象按標準計數。
菌落計數
菌落總數就是指在一定條件下(如需氧情況、營養(yǎng)條件、pH、培養(yǎng)溫度和時間等)每克(每毫升)檢樣所生長出來的細菌菌落總數。
菌落計數是用來判定食品被細菌污染的程度及衛(wèi)生質量，它反映食品在生產過程中是否符合衛(wèi)生要求，以便對被檢樣品做出適當的衛(wèi)生學評價。菌落總數的多少在一定程度上標志著食品衛(wèi)生質量的優(yōu)劣。
目前，菌落計數一般采用的是平板菌落計數法，是種統計物品含菌數的有效方法。
在常規(guī)的微生物學實驗中，不管是食品衛(wèi)生細菌學檢測，還是藥品微生物限度檢查，還是研究活性物質的抑菌性能實驗，都常常需要對樣品中的微生物進行定量或者濃度計算；眾多微生物定量方法中最常用的就是對培養(yǎng)后的培養(yǎng)皿上所生長菌落進行總數統計的菌落總數統計定量方法。
關于計數的困擾
1、如何保證檢測結果的有效性？
設計空白對照
（1）檢驗過程中需要做空白對照，用來判斷培養(yǎng)基、稀釋液、平皿或吸管是否存在污染，完美的空白試驗平板上應該無細菌生長。
實驗環(huán)境要求
（2）定期檢測空氣潔凈度，判斷實驗環(huán)境是否符合標準要求。
滅菌處理
（3）細菌檢測過程中所用到的一切用具和培養(yǎng)基都需經過滅菌程序。
2、如何提高檢測結果的準確性？
樣品消毒
（1）任何樣品在打開包裝前，都要在取樣開口處的周圍表面進行消毒。
（2）采樣時對于易堵塞吸管的樣品（如糕點面包辣條等），可以放置一塊無菌紗布在放樣液的容器瓶口下方，作過濾用。
稀釋度選擇
樣品的稀釋是菌落計數的關鍵步驟之一。對于固體或半固體樣品，通常需要將樣品均質化后進行系列稀釋。建議使用無菌的生理鹽水或磷酸鹽緩沖液進行稀釋，并確保每次稀釋后的樣品均勻混合。對于液體樣品，可以直接進行稀釋，但同樣需要注意混合均勻性。選擇合適的稀釋度非常重要，一般建議選擇2-3個適宜的稀釋度進行檢測，以確保最終的菌落數在可計數范圍內（30-300 CFU）。
參考值
參考值可能是實驗室經驗累積的估算數，也可能是樣品本身標注的活菌數值。對于有經驗的操作者而言，即使沒有明確的參考值，也能憑借經驗準確進行稀釋操作。然而，對于新手來說，缺乏參考值的情況下可能會感到迷茫。
在進行菌落計數時，首先盡可能獲取參考值。根據參考值，可以選擇適當的稀釋倍數，然后將適量的樣品與適量的培養(yǎng)基混合，并進行均勻涂布。如此一來，可以保證每個培養(yǎng)皿中的菌落數量在合適的范圍內，從而得到準確可靠的結果。
擴大計數范圍
選擇合適的稀釋倍數和擴大計數范圍是至關重要的。一種常見的策略是根據經驗或參考值將樣品稀釋到一定倍數，然后在不同梯度上進行涂布。例如，稀釋到10^-8的樣品可以選擇不同梯度的平板進行涂布，比如10^-8、10^-7、10^-6各三個平板。同時，也可以選擇其他梯度如10^-9、10^-5、10^-4各一個平板，并留出一個對照平板。
不同的食品其「菌落總數」的檢出限量也不一致，通常糕點類樣品中細菌量偏低，稀釋度應選擇較小的，稀釋度可選1:10 。
其次，培養(yǎng)基的選擇和準備也是影響菌落計數結果的重要因素。平板計數瓊脂（PCA）是常用的培養(yǎng)基之一，其滅菌條件為121℃、15分鐘。在傾注培養(yǎng)基時，應確保培養(yǎng)基溫度適宜（約46℃），以避免高溫對微生物的殺傷作用。此外，對于一些特殊樣品，可以在培養(yǎng)基中加入適量的2,3,5-三苯基氯化四氮唑（TTC），以便在培養(yǎng)后將菌落染色，方便計數。
3、為什么瓊脂凝固后需要倒置？
平板倒置培養(yǎng)，可以減少培養(yǎng)基中水分的蒸發(fā)影響細菌生長，又可以防止凝結在皿蓋上的水蒸氣流到培養(yǎng)基表面導致染菌出現菌落蔓延及難以計數。
4、菌落蔓延的原因及解決辦法？
菌落蔓延主要有兩個原因，一是操作不當；二是樣品中含有變形桿菌等運動性強的細菌。
操作中需要注意3個關鍵點：
（1）傾注培養(yǎng)基時搖晃平皿使其混合均勻，減少菌塊；
（2）樣品稀釋后，盡快傾注平板。從稀釋到傾注結束時間控制在30分鐘之內，避免樣液干涸造成菌落成團；平板凝固后馬上倒置；
（3）若樣品中含有變形桿菌，則可以覆蓋一層培養(yǎng)基（約4mL）。
5、異?，F象平板如何進行菌落計數？
在完成培養(yǎng)后應立即進行計數，通常選取30-300CFU菌落數、無蔓延菌落生長的平板作為計數，但實際操作中會出現各種異?，F象。
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