實(shí)驗(yàn)室微生物樣品的取樣方法與取樣要求及核心原則！
小楊 / 2025-06-12 10:08:20
百歐博偉生物：微生物樣品的取樣是微生物檢測(cè)的關(guān)鍵第一步，直接影響結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。不規(guī)范的取樣會(huì)導(dǎo)致整個(gè)檢測(cè)過(guò)程失去意義。以下詳細(xì)說(shuō)明微生物樣品的取樣方法及要求：
一、核心原則
1、無(wú)菌原則：這是微生物取樣的首要原則。整個(gè)取樣過(guò)程必須防止樣品被外源微生物污染，同時(shí)也要防止樣品中的微生物污染環(huán)境或人員。
2、代表性原則：所取樣品必須能代表被檢測(cè)的整批物料、環(huán)境或特定目標(biāo)區(qū)域。
3、及時(shí)性原則：取樣后應(yīng)盡快進(jìn)行檢測(cè)或采取適當(dāng)措施（如低溫保存）抑制微生物生長(zhǎng)/死亡，保證樣品在檢測(cè)前的狀態(tài)盡可能接近取樣時(shí)。
4、安全性原則：取樣人員需做好個(gè)人防護(hù)，避免被病原微生物感染，同時(shí)防止樣品泄露污染環(huán)境。對(duì)于已知或疑似高致病性微生物樣品，需在相應(yīng)生物安全級(jí)別下操作。
5、可追溯性原則：詳細(xì)記錄取樣信息，確保樣品可追溯。
二、取樣前準(zhǔn)備
1、制定取樣計(jì)劃：
明確檢測(cè)目的（如：常規(guī)監(jiān)測(cè)、污染調(diào)查、驗(yàn)證等）。
確定取樣對(duì)象（水、食品、藥品、環(huán)境表面、空氣、臨床標(biāo)本等）。
根據(jù)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)、法規(guī)要求或研究目的，確定取樣點(diǎn)、取樣量、取樣頻率、取樣方法。
進(jìn)行合理的抽樣設(shè)計(jì)（隨機(jī)抽樣、分層抽樣、系統(tǒng)抽樣等），確保代表性。
2、準(zhǔn)備取樣工具和容器：
無(wú)菌：所有直接接觸樣品的工具（如取樣勺、鑷子、剪刀、注射器、吸管、拭子）和容器（如樣品袋、樣品瓶、試管）必須預(yù)先滅菌（常用干熱、濕熱、輻照滅菌法），并在無(wú)菌狀態(tài)下運(yùn)輸和開(kāi)啟。
適用性：材質(zhì)應(yīng)對(duì)微生物無(wú)毒、不吸附目標(biāo)微生物（如塑料優(yōu)于玻璃，尤其對(duì)于病毒）。容器應(yīng)密封良好，防滲漏。
標(biāo)簽：準(zhǔn)備防水、不易脫落的標(biāo)簽。
保護(hù)套/包裝：用于保護(hù)無(wú)菌取樣工具（如注射器針帽、無(wú)菌袋）。
3、準(zhǔn)備運(yùn)輸容器：
根據(jù)樣品特性和檢測(cè)項(xiàng)目要求，準(zhǔn)備保溫箱（冷藏箱或保溫箱），內(nèi)置足夠的冷凍劑（冰袋、干冰等）或溫度維持材料，確保樣品在運(yùn)輸過(guò)程中維持規(guī)定的溫度（通常0-4°C冷藏，特殊樣品如病毒可能需-70°C或液氮）。
運(yùn)輸容器應(yīng)堅(jiān)固、防震、防漏。
4、準(zhǔn)備記錄表格：設(shè)計(jì)并打印好取樣記錄單。
5、人員準(zhǔn)備：
取樣人員需經(jīng)過(guò)培訓(xùn)，熟悉取樣程序、無(wú)菌操作技術(shù)和安全防護(hù)要求。
穿戴適當(dāng)?shù)膫€(gè)人防護(hù)裝備：無(wú)菌手套、口罩、帽子、防護(hù)服（必要時(shí)穿無(wú)菌服）、護(hù)目鏡（必要時(shí)）等。進(jìn)入潔凈區(qū)需遵守更嚴(yán)格的更衣程序。
手部清潔與消毒：取樣前必須徹底洗手，并用75%酒精或其他有效消毒劑消毒雙手。更換手套時(shí)需重新消毒手。
三、取樣方法（根據(jù)樣品類(lèi)型）
1、液體樣品 (水、飲料、液態(tài)奶、尿液、體液等)：
方法：充分混勻樣品（避免產(chǎn)生氣泡）。用無(wú)菌注射器、移液器或虹吸裝置吸取規(guī)定體積。對(duì)于開(kāi)放水體，應(yīng)在規(guī)定深度取樣。
容器：無(wú)菌玻璃瓶或塑料瓶（帶螺旋蓋或密封墊）。
要求：取樣時(shí)避免接觸容器口及內(nèi)壁。瓶?jī)?nèi)留適當(dāng)頂空（約10%）。某些檢測(cè)（如揮發(fā)性酸）需裝滿(mǎn)無(wú)頂空。水樣檢測(cè)余氯時(shí)，取樣瓶需提前加入硫代硫酸鈉中和余氯。
2、固體或半固體樣品 (食品、土壤、糞便、組織、藥膏等)：
方法：
無(wú)菌勺/鑷子/刀：在樣品不同部位多點(diǎn)取樣，混合后取代表性部分裝入無(wú)菌袋或瓶中。對(duì)于大塊樣品，需先無(wú)菌切開(kāi)，取內(nèi)部和表面部分。
均質(zhì)法：將定量樣品（如25g）加入含適量無(wú)菌稀釋液（如緩沖蛋白胨水）的無(wú)菌均質(zhì)袋中，用拍打式均質(zhì)器拍打1-2分鐘，制成均勻的1:10初始懸浮液，用于后續(xù)檢測(cè)。此法最常用，分散效果好。
研磨法：少量堅(jiān)硬樣品可在無(wú)菌研缽中研磨后轉(zhuǎn)移。
拭子法 (表面取樣)：見(jiàn)下文。
容器：無(wú)菌廣口瓶、無(wú)菌密封袋（帶濾膜或均質(zhì)袋）。
要求：確保工具足夠深入取樣點(diǎn)，保證代表性。避免樣品在取樣過(guò)程中融化或溫度升高。
3、表面樣品 (設(shè)備、器具、工作臺(tái)、手部等)：
方法：
接觸碟法：將裝有固體培養(yǎng)基的平皿直接壓觸在平整表面規(guī)定時(shí)間（通常10-60秒），蓋上蓋子培養(yǎng)。適用于平整規(guī)則表面。
棉拭子/海綿拭子法：
用無(wú)菌拭子蘸取適量無(wú)菌稀釋液或轉(zhuǎn)運(yùn)液，在規(guī)定的取樣面積內(nèi)用力、均勻擦拭，水平、垂直方向反復(fù)多次。
將拭子頭剪入或直接放入含適量無(wú)菌稀釋液/轉(zhuǎn)運(yùn)液的試管中，充分振蕩洗脫。
海綿拭子適用于大表面或不平整表面，吸附量更大。
沖洗法：向設(shè)備腔體（如管道、罐）內(nèi)注入定量無(wú)菌稀釋液，充分震蕩或循環(huán)沖洗，收集沖洗液作為樣品。
要求：明確標(biāo)示取樣區(qū)域。接觸碟法需確保培養(yǎng)基表面完全接觸。拭子法需保證擦拭力度、覆蓋面和濕潤(rùn)度。
4、空氣樣品：
方法：
沉降碟法 (被動(dòng)沉降)：將裝有固體培養(yǎng)基的平皿打開(kāi)，在規(guī)定高度和位置暴露規(guī)定時(shí)間（通常30分鐘至4小時(shí)），蓋上蓋子培養(yǎng)。計(jì)算沉降菌落數(shù)。
撞擊法 (主動(dòng)采樣)：使用空氣采樣器（如裂隙式、離心式、液體沖擊式），將空氣以一定流速撞擊到培養(yǎng)基表面或液體中，捕獲空氣中的粒子。結(jié)果以CFU/m³表示。
要求：根據(jù)潔凈級(jí)別要求選擇方法。采樣點(diǎn)、高度、時(shí)間、流量需按標(biāo)準(zhǔn)設(shè)定。避免氣流干擾。
5、臨床標(biāo)本 (痰、膿液、血液、腦脊液等)：
方法：嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作和生物安全規(guī)范。由專(zhuān)業(yè)醫(yī)護(hù)人員采集。
血液/體液：無(wú)菌穿刺采集，注入無(wú)菌血培養(yǎng)瓶（需氧/厭氧）或試管。
痰液：指導(dǎo)患者深咳取清晨痰。
拭子 (咽拭子、鼻拭子、傷口拭子)：使用專(zhuān)用轉(zhuǎn)運(yùn)拭子，在病灶處用力旋轉(zhuǎn)涂抹。
容器：專(zhuān)用無(wú)菌容器、血培養(yǎng)瓶、含轉(zhuǎn)運(yùn)介質(zhì)的拭子管。
要求：采集時(shí)機(jī)（如用藥前）、部位、方法對(duì)結(jié)果影響極大。需快速送檢，某些樣品需保溫。
四、取樣要求（關(guān)鍵控制點(diǎn)）
1、無(wú)菌操作：
取樣環(huán)境應(yīng)盡可能清潔（在超凈工作臺(tái)或生物安全柜內(nèi)進(jìn)行最佳）。
開(kāi)啟無(wú)菌容器前，用75%酒精擦拭外表面。
無(wú)菌工具和容器只能接觸樣品，避免觸碰非無(wú)菌表面。
取樣過(guò)程中動(dòng)作迅速、準(zhǔn)確，盡量減少樣品在空氣中的暴露時(shí)間。
2、防止交叉污染：
不同樣品或不同取樣點(diǎn)之間，必須更換無(wú)菌工具和手套。
避免取樣工具接觸容器口。
3、樣品標(biāo)識(shí)：
立即在容器上粘貼牢固標(biāo)簽，清晰標(biāo)注（至少包含）：
樣品唯一編號(hào)
樣品名稱(chēng)/描述
取樣日期和時(shí)間
取樣地點(diǎn)/具體位置
取樣人
檢測(cè)項(xiàng)目（如適用）
任何特殊處理（如添加中和劑）
填寫(xiě)詳細(xì)的取樣記錄單（包括以上信息及環(huán)境條件如溫度、濕度等）。
4、樣品量：必須滿(mǎn)足檢測(cè)方法要求的最小量，并考慮可能的復(fù)測(cè)需求。
5、溫度控制：
對(duì)溫度敏感的樣品（絕大多數(shù)微生物樣品），取樣后應(yīng)立即放入預(yù)冷的保溫箱（0-4°C），在運(yùn)輸和儲(chǔ)存過(guò)程中維持冷藏（除非特定微生物要求在室溫或更高溫度下運(yùn)輸，如某些寄生蟲(chóng)）。
冷凍樣品應(yīng)保持冷凍狀態(tài)（通常-18°C以下，特殊要求如-70°C）。
記錄取樣時(shí)樣品溫度（如可能）和運(yùn)輸過(guò)程中的溫度。
6、密封性：確保容器密封良好，防止泄漏、污染和水分蒸發(fā)。
7、運(yùn)輸時(shí)限：取樣后應(yīng)盡快送抵實(shí)驗(yàn)室。通常要求冷藏樣品在24-48小時(shí)內(nèi)檢測(cè)。具體時(shí)限依據(jù)樣品類(lèi)型、檢測(cè)項(xiàng)目、保存條件和標(biāo)準(zhǔn)要求確定。某些樣品（如病毒、厭氧菌）要求更短時(shí)限。
8、運(yùn)輸條件：使用合適的運(yùn)輸容器和足夠的冷凍劑，確保溫度符合要求。運(yùn)輸過(guò)程應(yīng)避免劇烈震蕩、陽(yáng)光直射。符合生物安全要求的樣品需三層包裝（主容器、輔助容器、外包裝），并附有運(yùn)輸文件。
五、特殊考慮
厭氧菌取樣：需使用專(zhuān)門(mén)的無(wú)氧轉(zhuǎn)運(yùn)裝置或培養(yǎng)基，盡量減少樣品暴露于空氣的時(shí)間。
病毒取樣：通常使用專(zhuān)用病毒轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基，嚴(yán)格低溫（干冰或液氮）保存運(yùn)輸。
揮發(fā)性樣品：容器應(yīng)裝滿(mǎn)無(wú)頂空。
高酸/高堿/高滲樣品：取樣后可能需要立即中和或調(diào)節(jié)滲透壓。
輻照/輻解敏感樣品：避免使用輻照滅菌的容器（如必須，需驗(yàn)證無(wú)影響）。
六、取樣記錄
必須詳細(xì)、準(zhǔn)確、及時(shí)地記錄所有取樣信息，至少包括：
取樣計(jì)劃編號(hào)/名稱(chēng)
樣品編號(hào)
樣品名稱(chēng)和描述
取樣日期和時(shí)間
精確的取樣地點(diǎn)（如設(shè)備編號(hào)、房間號(hào)、坐標(biāo)、深度等）
取樣方法
取樣量
取樣人
環(huán)境條件（溫度、濕度等）
觀(guān)察到的任何異常情況
使用的取樣工具和容器類(lèi)型
保存方式和運(yùn)輸要求
預(yù)定檢測(cè)項(xiàng)目
記錄應(yīng)清晰、不易涂改，并妥善保存。
七、常見(jiàn)錯(cuò)誤
未遵循無(wú)菌操作，導(dǎo)致污染。
取樣點(diǎn)/方法不具有代表性。
樣品量不足。
標(biāo)識(shí)不清或錯(cuò)誤。
容器選擇不當(dāng)或未滅菌。
未及時(shí)冷藏或冷凍。
運(yùn)輸時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或溫度失控。
記錄不完整或不準(zhǔn)確。
個(gè)人防護(hù)不到位。
總結(jié)：微生物取樣是一項(xiàng)技術(shù)性很強(qiáng)的工作，必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌原則、代表性原則和相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程(SOP)。充分的準(zhǔn)備、規(guī)范的操作、準(zhǔn)確的記錄和適當(dāng)?shù)谋４孢\(yùn)輸是保證后續(xù)微生物檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的前提。務(wù)必根據(jù)具體的樣品類(lèi)型和檢測(cè)目的，參考相應(yīng)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、藥典或企業(yè)內(nèi)部規(guī)定進(jìn)行操作。記住：垃圾進(jìn)（取樣不規(guī)范），垃圾出（結(jié)果不可靠）。
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