食品接觸面微生物的主要檢驗(yàn)方法及關(guān)鍵注意事項(xiàng)！
小楊 / 2025-06-26 10:01:24
百歐博偉生物：針對(duì)食品接觸面的微生物檢驗(yàn)，是確保食品安全、預(yù)防食源性疾病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。以下是詳細(xì)的檢驗(yàn)方法及重要注意事項(xiàng)：
一、主要檢驗(yàn)方法（通常遵循標(biāo)準(zhǔn)如ISO 18593、GB 4789等）
1、涂抹法（表面拭子法）：
原理：用無(wú)菌拭子（棉簽、海綿拭子等）蘸取無(wú)菌稀釋液或中和緩沖液，在規(guī)定的面積內(nèi)（通常10cm x 10cm = 100cm²）用力、均勻、系統(tǒng)地擦拭表面，將微生物轉(zhuǎn)移到拭子上。
步驟：
標(biāo)記采樣區(qū)域（可使用無(wú)菌模板）。
打開(kāi)無(wú)菌拭子包裝，用拭子頭蘸取適量無(wú)菌稀釋液/中和液（避免過(guò)飽和）。
在標(biāo)記區(qū)域內(nèi)，沿水平、垂直、對(duì)角線(xiàn)方向用力擦拭，同時(shí)旋轉(zhuǎn)拭子確保所有面都接觸表面。
將拭子頭剪斷或直接放入裝有定量的無(wú)菌稀釋液/中和液的試管中。
充分振蕩試管，使微生物洗脫到液體中，形成初始樣品液。
根據(jù)預(yù)期污染程度，對(duì)樣品液進(jìn)行適當(dāng)倍數(shù)的系列稀釋。
選擇合適稀釋度的樣品液，傾注平板或涂布平板進(jìn)行培養(yǎng)計(jì)數(shù)。
2、接觸平板法：
原理：使用特制的、培養(yǎng)基凸出于皿蓋的瓊脂平板，直接按壓在平整的待測(cè)表面上，使瓊脂與表面充分接觸，轉(zhuǎn)移微生物。
步驟：
打開(kāi)皿蓋，將凸起的瓊脂面直接、均勻、輕柔地按壓在待測(cè)表面（避免滑動(dòng)）。
保持按壓幾秒鐘（通常5-10秒）。
蓋回皿蓋。
將平板倒置放入恒溫培養(yǎng)箱中按標(biāo)準(zhǔn)條件培養(yǎng)。
計(jì)數(shù)瓊脂表面形成的菌落（CFU/plate）。結(jié)果通常表示為每個(gè)平板上的菌落數(shù)，或換算為CFU/cm²（需知道平板接觸面積）。
3、表面沖洗法：
原理：適用于難以擦拭或接觸的管道內(nèi)壁、容器內(nèi)部等。用定量的無(wú)菌稀釋液/中和液沖洗整個(gè)內(nèi)表面，收集沖洗液作為樣品。
步驟：
將一定量（如100ml）無(wú)菌稀釋液/中和液注入待測(cè)管道或容器。
密封開(kāi)口，劇烈振蕩或翻轉(zhuǎn)沖洗內(nèi)壁規(guī)定時(shí)間（如1分鐘）。
收集全部沖洗液。
根據(jù)情況可直接傾注平板或進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再傾注/涂布培養(yǎng)計(jì)數(shù)。
二、關(guān)鍵注意事項(xiàng)
1、無(wú)菌操作：
采樣人員必須經(jīng)過(guò)無(wú)菌操作培訓(xùn)，穿戴無(wú)菌手套、口罩、帽子、工作服。
采樣工具（拭子、試管、剪刀、鑷子、RODAC平板、稀釋液等）必須確保無(wú)菌并在使用前檢查包裝完整性。
打開(kāi)包裝、蘸取液體、接觸樣品表面、放入容器等步驟，必須防止環(huán)境微生物的污染。操作過(guò)程應(yīng)迅速、規(guī)范。
2、采樣點(diǎn)選擇：
代表性：根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，選擇關(guān)鍵控制點(diǎn)（CCP）后、清潔消毒后、生產(chǎn)過(guò)程中易污染或難清潔的部位（如設(shè)備縫隙、刀具、砧板、傳送帶接頭、灌裝口、員工手套等）。
隨機(jī)性：避免每次都采相同的點(diǎn)，以反映整體衛(wèi)生狀況。
面積與數(shù)量：明確采樣面積，并確保每次采樣面積一致。根據(jù)監(jiān)控計(jì)劃確定采樣頻率和點(diǎn)數(shù)。
3、中和劑使用：
至關(guān)重要！清潔消毒后采樣，殘留的消毒劑（如含氯消毒劑、季銨鹽、過(guò)氧化物等）會(huì)抑制微生物生長(zhǎng)，導(dǎo)致假陰性結(jié)果。
稀釋液/沖洗液中必須含有能有效中和殘留消毒劑的成分（如硫代硫酸鈉中和氯，卵磷脂吐溫80中和季銨鹽和酚類(lèi)，過(guò)氧化氫酶中和過(guò)氧化物）。
選擇標(biāo)準(zhǔn)化的商業(yè)無(wú)菌中和緩沖液，并驗(yàn)證其有效性。
4、采樣技術(shù)：
涂抹法：確保用力均勻，覆蓋整個(gè)規(guī)定面積，旋轉(zhuǎn)拭子，保證有效轉(zhuǎn)移微生物。避免拭子過(guò)干或過(guò)濕。
接觸平板法：按壓時(shí)用力均勻、輕柔、避免滑動(dòng)，確保瓊脂與表面完全接觸。只適用于非常平整光滑的表面。
及時(shí)處理：采樣后應(yīng)盡快將樣品（拭子試管、RODAC平板）放入冷藏箱（0-4°C）并在規(guī)定時(shí)間內(nèi)（通常≤24小時(shí)）送達(dá)實(shí)驗(yàn)室處理，防止微生物死亡或繁殖。
5、樣品標(biāo)識(shí)與記錄：
清晰標(biāo)記每個(gè)樣品（唯一編號(hào)、采樣日期時(shí)間、采樣點(diǎn)位置/名稱(chēng)、采樣人）。
詳細(xì)記錄采樣環(huán)境信息（如采樣時(shí)生產(chǎn)狀態(tài)、上次清潔消毒時(shí)間、使用的消毒劑等）。
6、實(shí)驗(yàn)室分析：
培養(yǎng)基質(zhì)量控制：使用符合標(biāo)準(zhǔn)的培養(yǎng)基，定期進(jìn)行質(zhì)控（無(wú)菌性、生長(zhǎng)性檢查）。
稀釋與接種：嚴(yán)格按標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行樣品稀釋和接種操作（傾注法溫度控制、涂布均勻性）。
培養(yǎng)條件：嚴(yán)格按目標(biāo)微生物要求控制培養(yǎng)溫度和時(shí)間（如
菌落總數(shù)PCA 30-35°C 48±2h；
大腸菌群VRBA 36±1°C 18-24h）。
菌落計(jì)數(shù)與報(bào)告：按標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)（選擇合適稀釋度的平板），報(bào)告結(jié)果（如CFU/cm²， CFU/拭子， CFU/平板）。注意區(qū)分目標(biāo)菌落和非目標(biāo)菌落。
7、結(jié)果解讀與行動(dòng)：
制定明確的微生物限量標(biāo)準(zhǔn)（基于法規(guī)、行業(yè)指南、企業(yè)內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)）。
建立超標(biāo)結(jié)果（OOS）的調(diào)查程序：立即復(fù)核實(shí)驗(yàn)過(guò)程、檢查采樣記錄、復(fù)測(cè)該點(diǎn)及周邊區(qū)域、評(píng)估清潔消毒程序有效性、必要時(shí)采取糾正措施。
進(jìn)行趨勢(shì)分析，識(shí)別衛(wèi)生管理的薄弱環(huán)節(jié)，持續(xù)改進(jìn)。
三、補(bǔ)充重要注意事項(xiàng)
人員培訓(xùn)：所有參與采樣和實(shí)驗(yàn)室分析的人員必須接受充分的培訓(xùn)并通過(guò)考核。
環(huán)境控制：實(shí)驗(yàn)室環(huán)境應(yīng)符合微生物檢測(cè)要求，避免交叉污染。采樣時(shí)也應(yīng)盡量減少對(duì)生產(chǎn)環(huán)境的干擾。
方法驗(yàn)證：企業(yè)采用的檢驗(yàn)方法應(yīng)進(jìn)行適用性驗(yàn)證。
采樣計(jì)劃：制定科學(xué)、系統(tǒng)的環(huán)境監(jiān)控計(jì)劃，明確采樣點(diǎn)、頻率、方法、目標(biāo)微生物、可接受標(biāo)準(zhǔn)、職責(zé)分工等。
總結(jié)：
食品接觸面微生物檢驗(yàn)是保障食品安全的重要工具，但其結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性高度依賴(lài)于嚴(yán)格的無(wú)菌操作、正確的采樣技術(shù)（尤其是中和劑的使用）、規(guī)范的實(shí)驗(yàn)室分析以及科學(xué)的采樣計(jì)劃與結(jié)果解讀。忽視任何環(huán)節(jié)都可能導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果，進(jìn)而帶來(lái)食品安全風(fēng)險(xiǎn)或造成不必要的生產(chǎn)中斷。務(wù)必遵循相關(guān)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)規(guī)范或國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行操作。
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