實(shí)驗(yàn)室無(wú)菌操作的核心原則與要求及無(wú)菌室的管理要求！
小楊 / 2025-07-01 10:42:24
百歐博偉生物：實(shí)驗(yàn)室無(wú)菌操作和無(wú)菌室管理是確保實(shí)驗(yàn)（尤其是微生物學(xué)、細(xì)胞培養(yǎng)、分子生物學(xué)等）結(jié)果準(zhǔn)確可靠、防止交叉污染和保障人員安全的關(guān)鍵。以下是詳細(xì)的要求和規(guī)范：
一、無(wú)菌操作的核心原則與要求
1、環(huán)境控制：
在指定區(qū)域進(jìn)行：所有無(wú)菌操作必須在無(wú)菌室、生物安全柜（BSC）或超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。這些區(qū)域經(jīng)過(guò)凈化處理，提供單向?qū)恿鳎ㄍǔＪ谴怪被蛩剑┑目諝?，保護(hù)工作區(qū)域免受外部污染。
避免氣流干擾：操作時(shí)盡量減少在開(kāi)放區(qū)域走動(dòng)，避免快速開(kāi)關(guān)門(mén)，禁止在操作區(qū)域上方傳遞物品，以免破壞氣流屏障。
操作前準(zhǔn)備：確保工作區(qū)域清潔無(wú)菌。使用前，用70-75%乙醇或其他批準(zhǔn)的消毒劑徹底擦拭工作臺(tái)面、設(shè)備外表面（如移液器、試劑瓶）以及手套。
2、人員要求與行為規(guī)范：
著裝規(guī)范：
進(jìn)入無(wú)菌室前必須更換專(zhuān)用潔凈服（連體服或大褂）、帽子（完全包住頭發(fā)）和口罩（覆蓋口鼻）。
必須穿戴無(wú)粉、滅菌的一次性手套。手套在接觸非無(wú)菌表面（如門(mén)把手、電話(huà)、記錄本）后、操作不同樣品前、或明顯污染后必須立即更換或用酒精徹底消毒。操作過(guò)程中避免觸摸臉部、頭發(fā)等。
必要時(shí)佩戴護(hù)目鏡或面罩。
個(gè)人衛(wèi)生：進(jìn)入前徹底洗手（使用抗菌洗手液，遵循七步洗手法），并用酒精消毒。長(zhǎng)發(fā)必須束起完全包裹在帽子里。禁止佩戴首飾（手表、戒指、手鏈等）。
行為規(guī)范：
動(dòng)作要輕緩、準(zhǔn)確、有序，避免劇烈動(dòng)作產(chǎn)生氣流或揚(yáng)塵。
禁止在無(wú)菌室內(nèi)交談、咳嗽、打噴嚏。如需說(shuō)話(huà)，務(wù)必側(cè)身避開(kāi)工作區(qū)。
禁止在無(wú)菌室內(nèi)飲食、吸煙、嚼口香糖、存放個(gè)人物品。
盡量減少在無(wú)菌室內(nèi)的停留時(shí)間和人員數(shù)量。
操作時(shí)身體和手臂避免越過(guò)開(kāi)放的培養(yǎng)皿、試劑瓶口或細(xì)胞瓶口上方。
3、物品準(zhǔn)備與處理：
滅菌：所有直接接觸無(wú)菌區(qū)域或樣品的物品（培養(yǎng)皿、吸頭、移液管、試劑瓶、手術(shù)器械、培養(yǎng)基等）必須經(jīng)過(guò)有效的滅菌處理（高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌、過(guò)濾除菌、輻照滅菌等），并在有效期內(nèi)使用。滅菌指示膠帶/標(biāo)簽應(yīng)顯示滅菌成功。
無(wú)菌傳遞：
盡量使用帶有螺旋蓋或橡膠塞的容器，避免使用棉塞（易脫落纖維）。
物品進(jìn)入無(wú)菌操作區(qū)前，外表面必須用消毒劑擦拭干凈。
使用火焰灼燒玻璃器皿口（如瓶口、試管口）和金屬器械（如鑷子、接種環(huán)）進(jìn)行滅菌，并充分冷卻后再接觸樣品或培養(yǎng)基（避免燙死細(xì)胞/微生物）。灼燒后避免觸碰非無(wú)菌表面。
打開(kāi)包裝（如吸頭盒、培養(yǎng)皿包裝）時(shí)，確保內(nèi)表面不接觸非無(wú)菌表面或手套污染部位。
擺放：
工作臺(tái)面物品擺放整齊有序，只放置本次操作必需的物品。
無(wú)菌物品（如開(kāi)蓋的培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿）應(yīng)放置在潔凈氣流的下游區(qū)域（對(duì)于垂直流超凈臺(tái)，放在臺(tái)面靠后位置；對(duì)于水平流，放在遠(yuǎn)離操作者的一側(cè)）。
污染性物品（如用過(guò)的吸頭、廢棄的培養(yǎng)物）應(yīng)放置在專(zhuān)用廢棄容器內(nèi)（如含消毒液的廢液缸、生物危害袋），并置于氣流的下游或側(cè)方，避免污染無(wú)菌物品和工作區(qū)。
4、操作技術(shù)：
開(kāi)蓋/揭蓋：培養(yǎng)皿蓋或試劑瓶蓋打開(kāi)后，應(yīng)倒置放置或拿在手中，避免內(nèi)表面朝上接觸空氣落菌。操作時(shí)蓋子離開(kāi)開(kāi)口的時(shí)間越短越好。
移液：
使用無(wú)菌移液器和無(wú)菌吸頭。移液器槍頭避免觸碰非目標(biāo)容器壁或臺(tái)面。
吸取液體時(shí)，動(dòng)作平穩(wěn)，避免產(chǎn)生氣泡或液體濺出。
排出液體時(shí)，吸頭尖端輕觸容器壁，讓液體順壁流下，避免懸空滴落產(chǎn)生氣溶膠。
禁止用嘴吸取任何液體！必須使用移液助吸器（移液器、吸球、電吸）。
接種/轉(zhuǎn)移：
使用無(wú)菌的接種環(huán)、接種針或巴氏吸管。
接種環(huán)/針使用前后必須在火焰上徹底灼燒滅菌（燒至紅熱），并在無(wú)菌區(qū)域冷卻。
轉(zhuǎn)移液體時(shí)，避免兩容器口直接接觸。
避免交叉污染： 操作不同樣品或試劑時(shí)，必須更換吸頭、吸管、接種環(huán)等。手套接觸過(guò)一種樣品后，在操作下一種樣品前應(yīng)用酒精消毒或更換手套。
二、無(wú)菌室管理要求
1、準(zhǔn)入與培訓(xùn)：
只有經(jīng)過(guò)嚴(yán)格無(wú)菌操作規(guī)范培訓(xùn)并考核合格的人員方可進(jìn)入無(wú)菌室進(jìn)行操作。
所有人員必須熟知無(wú)菌室管理規(guī)定、應(yīng)急處理程序和生物安全知識(shí)。
建立人員進(jìn)出登記制度。
2、環(huán)境清潔與消毒：
日常清潔：每次使用前后，用消毒劑徹底擦拭所有工作臺(tái)面、設(shè)備表面（BSC/超凈臺(tái)內(nèi)外）、椅子、門(mén)把手、地面等。清潔工具（抹布、拖把）應(yīng)專(zhuān)用，使用后妥善消毒處理。
定期深度清潔：制定計(jì)劃，定期（如每周、每月）進(jìn)行更徹底的清潔，包括墻壁、天花板、設(shè)備內(nèi)部（在專(zhuān)業(yè)人員指導(dǎo)下或由專(zhuān)業(yè)人員執(zhí)行）、層流裝置表面等。
空氣消毒：
紫外線照射：是常用的方法。在操作前和操作后（人員離開(kāi)后），開(kāi)啟紫外燈照射至少30分鐘（具體時(shí)間根據(jù)房間大小和燈管功率確定）。重要警告：絕對(duì)禁止在紫外燈開(kāi)啟時(shí)進(jìn)入房間或在室內(nèi)操作，紫外線對(duì)人體皮膚和眼睛有嚴(yán)重傷害！紫外燈管需定期清潔（用酒精擦拭）和檢測(cè)/更換（通常每半年至一年，或根據(jù)強(qiáng)度監(jiān)測(cè)結(jié)果），確保殺菌效果。
其他方法：臭氧發(fā)生器、化學(xué)熏蒸（如甲醛，需專(zhuān)業(yè)人員操作，有嚴(yán)格安全要求）等，用于更徹底的終末消毒，頻率較低（如季度、半年或必要時(shí)）。
消毒劑管理：使用經(jīng)認(rèn)證有效的消毒劑，定期更換（防止失效和微生物產(chǎn)生耐受性），并按照說(shuō)明書(shū)正確配制和使用。
3、層流設(shè)備維護(hù)：
生物安全柜/超凈工作臺(tái)：
每次使用前后進(jìn)行表面清潔消毒。
定期（通常每年一次，或按廠家建議）由有資質(zhì)的專(zhuān)業(yè)機(jī)構(gòu)進(jìn)行性能檢測(cè)（包括氣流速度、氣流模式、高效過(guò)濾器完整性噪聲、光照度等），確保符合安全標(biāo)準(zhǔn)。
高效過(guò)濾器（HEPA/ULPA）根據(jù)檢測(cè)結(jié)果和使用情況定期更換（通常每3-5年，或阻力過(guò)大、效率下降時(shí)）。
避免在BSC內(nèi)使用明火（酒精燈），以免破壞氣流和損壞高效過(guò)濾器。應(yīng)使用無(wú)菌的、一次性接種環(huán)或電加熱接種環(huán)滅菌器。
房間層流系統(tǒng)：定期更換初效、中效、高效過(guò)濾器，維護(hù)風(fēng)機(jī)，確保房間潔凈度和壓差（通常無(wú)菌室對(duì)走廊/緩沖間保持正壓，防止外部污染進(jìn)入）。
4、物品管理：
專(zhuān)用性：無(wú)菌室內(nèi)的物品（設(shè)備、耗材、試劑）應(yīng)盡可能專(zhuān)用，不與非潔凈區(qū)混用。
有序存放：物品應(yīng)存放在指定位置，標(biāo)識(shí)清晰，保持整潔。無(wú)菌耗材應(yīng)存放在潔凈的柜子或抽屜內(nèi)。
廢棄物管理：
設(shè)立專(zhuān)用、標(biāo)識(shí)清晰的生物危害廢棄物容器（銳器盒、生物危害袋/桶）。
所有接觸過(guò)生物材料的廢棄物必須視為生物危害廢物，嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)室生物安全規(guī)定進(jìn)行處理（高壓滅菌、化學(xué)消毒或交由有資質(zhì)的單位處理）。
廢棄物應(yīng)及時(shí)清理，不得在無(wú)菌室內(nèi)堆積。
禁止帶入：嚴(yán)禁將個(gè)人物品（書(shū)包、食品、飲料、手機(jī)、非實(shí)驗(yàn)用文件等）帶入核心無(wú)菌操作區(qū)。必要的記錄本和筆應(yīng)專(zhuān)用并定期消毒。
5、環(huán)境監(jiān)測(cè)：
沉降菌檢測(cè)：定期（如每月、每季度）在操作期間和操作后，在關(guān)鍵位置（工作臺(tái)面、BSC內(nèi)部）放置營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板（暴露一定時(shí)間，如30分鐘），培養(yǎng)后計(jì)數(shù)菌落數(shù)，評(píng)估空氣和表面的微生物污染水平。結(jié)果應(yīng)符合既定標(biāo)準(zhǔn)。
表面微生物檢測(cè)：使用接觸碟或棉拭子法，定期對(duì)工作臺(tái)面、設(shè)備表面、手套等進(jìn)行采樣培養(yǎng)監(jiān)測(cè)。
塵埃粒子計(jì)數(shù)：定期檢測(cè)空氣中的塵埃粒子濃度，評(píng)估潔凈度級(jí)別。
壓差監(jiān)測(cè)：持續(xù)監(jiān)測(cè)無(wú)菌室與相鄰區(qū)域的壓差，確保維持正壓。
記錄與趨勢(shì)分析：所有監(jiān)測(cè)結(jié)果必須詳細(xì)記錄，并進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)超標(biāo)或不良趨勢(shì)應(yīng)及時(shí)調(diào)查原因并采取糾正措施。
6、安全與應(yīng)急：
配備必要的應(yīng)急設(shè)備：洗眼器、緊急噴淋裝置、急救箱、滅火器、泄漏處理包。
制定并張貼清晰的應(yīng)急預(yù)案：包括生物材料泄漏、化學(xué)品泄漏、火災(zāi)、人員傷害等的處理流程。
定期進(jìn)行安全培訓(xùn)和應(yīng)急演練。
確保緊急出口暢通。
7、文件與記錄：
建立完善的無(wú)菌室管理SOP（標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程），包括清潔消毒規(guī)程、設(shè)備操作維護(hù)規(guī)程、環(huán)境監(jiān)測(cè)規(guī)程、人員培訓(xùn)規(guī)程、廢棄物處理規(guī)程、應(yīng)急預(yù)案等。
詳細(xì)記錄：人員進(jìn)出、設(shè)備使用、清潔消毒、維護(hù)保養(yǎng)、環(huán)境監(jiān)測(cè)、培養(yǎng)基/試劑配制與滅菌、廢棄物處理、培訓(xùn)、偏差與糾正措施等。所有記錄應(yīng)真實(shí)、準(zhǔn)確、及時(shí)、可追溯。
三、總結(jié)：
無(wú)菌操作和無(wú)菌室管理是一個(gè)系統(tǒng)工程，需要嚴(yán)格的人員培訓(xùn)、規(guī)范的操作行為、潔凈的環(huán)境維護(hù)、有效的消毒滅菌、完善的監(jiān)測(cè)體系以及科學(xué)的管理制度共同保障。任何環(huán)節(jié)的疏忽都可能導(dǎo)致污染，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果甚至威脅人員安全。因此，必須將無(wú)菌意識(shí)貫穿始終，嚴(yán)格遵守各項(xiàng)規(guī)定，并持續(xù)改進(jìn)。
北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司擁有對(duì)菌種、細(xì)胞、培養(yǎng)基、配套試劑等產(chǎn)品需求者的極優(yōu)質(zhì)服務(wù)，對(duì)購(gòu)買(mǎi)項(xiàng)目的前期資料提供,中期合同保證,后期貨物跟蹤到最終售后的確保項(xiàng)目準(zhǔn)確到位，都有相關(guān)人士進(jìn)行維護(hù),確保您在
微生物菌種查詢(xún)網(wǎng)中獲得最優(yōu)質(zhì)服務(wù)！也正因?yàn)榇?，北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司與國(guó)內(nèi)外多家研制單位、生物制藥、第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)和科研院所院校、化工企業(yè)有著良好、長(zhǎng)期和穩(wěn)定的合作關(guān)系！
下載附件
上一篇：食品微生物檢測(cè)操作中的常見(jiàn)問(wèn)題及解決辦法有哪些？
下一篇：保鮮庫(kù)使用前消毒殺菌的重要性及關(guān)鍵步驟與綜合措施！