純凈水微生物檢測(cè)方法之傳統(tǒng)與快速檢測(cè)方法及注意事項(xiàng)！
小楊 / 2025-08-04 09:49:06
百歐博偉生物：純凈水的微生物檢測(cè)是保障其衛(wèi)生安全的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，主要用于檢測(cè)水中是否存在致病微生物或其他有害微生物，常用方法包括傳統(tǒng)培養(yǎng)法、快速檢測(cè)法等。以下是詳細(xì)的檢測(cè)方法介紹：
一、樣品采集與預(yù)處理
1、采樣要求
采樣工具：使用無菌采樣瓶（如 500mL 廣口玻璃瓶，預(yù)先經(jīng) 121℃高壓滅菌 20 分鐘）。
采樣操作：打開純凈水包裝后，避免手部接觸瓶口，直接將水樣倒入采樣瓶，裝滿后立即蓋緊瓶蓋（減少空氣殘留），貼上標(biāo)簽（注明樣品名稱、采樣時(shí)間、地點(diǎn)等）。
樣品保存：采樣后需在 4℃冷藏（不超過 6 小時(shí)），盡快送檢；若無法及時(shí)檢測(cè)，需在 24 小時(shí)內(nèi)完成分析。
2、預(yù)處理
一般純凈水無需預(yù)處理，直接檢測(cè)；若懷疑微生物含量極低，可通過薄膜過濾法濃縮樣品（將一定體積水樣通過 0.45μm 無菌濾膜，截留微生物后培養(yǎng)）。
二、傳統(tǒng)培養(yǎng)法（國標(biāo)常用方法）
1、菌落總數(shù)測(cè)定（GB 4789.2-2016）
原理：通過平板計(jì)數(shù)法，統(tǒng)計(jì)水樣中活菌在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上形成的菌落數(shù)，反映水中微生物污染的總體水平。
步驟：
稀釋水樣：取 1mL 水樣，用無菌生理鹽水梯度稀釋（如 1:10、1:100 等，根據(jù)污染程度選擇稀釋倍數(shù)）。
接種培養(yǎng)：取各稀釋倍數(shù)的水樣 1mL，分別注入無菌平皿，倒入融化并冷卻至 46℃左右的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，搖勻后凝固。
培養(yǎng)條件：36℃±1℃培養(yǎng) 48h±2h。
結(jié)果計(jì)數(shù)：選取菌落數(shù)在 30-300 之間的平皿計(jì)數(shù)，計(jì)算每毫升水樣中的菌落總數(shù)（單位：CFU/mL）。
2、大腸菌群測(cè)定（GB 4789.3-2016）
原理：大腸菌群是腸道致病菌的指示菌，其存在提示可能存在腸道致病菌污染。
步驟：
初發(fā)酵試驗(yàn)：取 10mL、1mL、0.1mL 水樣分別接種到乳糖膽鹽發(fā)酵管中，36℃±1℃培養(yǎng) 24h±2h，觀察是否產(chǎn)氣（若產(chǎn)氣，需進(jìn)行復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)）。
復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)：將初發(fā)酵陽性管中的菌液接種到伊紅美藍(lán)瓊脂平板，培養(yǎng)后挑取典型菌落（紫黑色、有金屬光澤），接種到乳糖發(fā)酵管，36℃±1℃培養(yǎng) 24h±2h，若產(chǎn)氣則判定為大腸菌群陽性。
結(jié)果計(jì)算：根據(jù)陽性管數(shù)，查 MPN（最大可能數(shù)）表，得出每 100mL 水樣中的大腸菌群 MPN 值。
需通過增菌培養(yǎng)（如使用緩沖蛋白胨水、四硫磺酸鈉煌綠增菌液等）、分離培養(yǎng)（選擇特定培養(yǎng)基，如 SS 瓊脂、HE 瓊脂）、生化試驗(yàn)和血清學(xué)試驗(yàn)進(jìn)行鑒定，操作較復(fù)雜，常用于針對(duì)性檢測(cè)。
三、快速檢測(cè)法
1、薄膜過濾法
適用于低菌含量水樣：將 100mL 水樣通過 0.45μm 無菌濾膜，將濾膜貼在選擇性培養(yǎng)基（如大腸菌群用 VRBA 培養(yǎng)基）上，36℃±1℃培養(yǎng) 24h，直接計(jì)數(shù)濾膜上的目標(biāo)菌落。
2、酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）
原理：利用抗原 - 抗體特異性結(jié)合，通過酶標(biāo)記抗體檢測(cè)目標(biāo)微生物（如
沙門氏菌），操作時(shí)間約 2-4h，靈敏度高，但需特定抗體試劑。
3、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）法
原理：通過擴(kuò)增微生物特有的 DNA 片段（如
大腸桿菌的 uidA 基因），實(shí)現(xiàn)快速檢測(cè)，可在幾小時(shí)內(nèi)完成，特異性強(qiáng)，適用于微量微生物檢測(cè)，但易受抑制劑干擾。
4、ATP 生物發(fā)光法
原理：利用熒光素酶催化 ATP（微生物代謝產(chǎn)物）與熒光素反應(yīng)產(chǎn)生發(fā)光，通過發(fā)光強(qiáng)度定量微生物總量，操作僅需 10-30 分鐘，可用于現(xiàn)場(chǎng)快速篩查，但無法區(qū)分微生物種類。
四、結(jié)果判定與標(biāo)準(zhǔn)
菌落總數(shù)：純凈水國標(biāo)（GB 17323-1998）要求≤20 CFU/mL。
大腸菌群：不得檢出（每 100mL 水樣中）。
若檢測(cè)結(jié)果超標(biāo)，需重新采樣復(fù)查，確認(rèn)污染后追溯原因（如生產(chǎn)環(huán)節(jié)污染、包裝材料問題等）。
五、注意事項(xiàng)
全程無菌操作：避免環(huán)境、工具或操作人員帶入雜菌，影響結(jié)果準(zhǔn)確性。
培養(yǎng)基質(zhì)量：需保證培養(yǎng)基無菌、成分合格，定期做陽性對(duì)照試驗(yàn)。
儀器校準(zhǔn)：培養(yǎng)箱、移液器等設(shè)備需定期校準(zhǔn)，確保溫度、體積準(zhǔn)確。
通過以上方法，可全面評(píng)估純凈水的微生物污染狀況，保障飲用安全。實(shí)際檢測(cè)中，可根據(jù)需求選擇傳統(tǒng)方法（準(zhǔn)確性高，適合國標(biāo)檢測(cè)）或快速方法（高效，適合快速篩查）。
北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司擁有對(duì)菌種、細(xì)胞、培養(yǎng)基、配套試劑等產(chǎn)品需求者的極優(yōu)質(zhì)服務(wù)，對(duì)購買項(xiàng)目的前期資料提供,中期合同保證,后期貨物跟蹤到最終售后的確保項(xiàng)目準(zhǔn)確到位，都有相關(guān)人士進(jìn)行維護(hù),確保您在
微生物菌種查詢網(wǎng)中獲得最優(yōu)質(zhì)服務(wù)！也正因?yàn)榇?，北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司與國內(nèi)外多家研制單位、生物制藥、第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)和科研院所院校、化工企業(yè)有著良好、長(zhǎng)期和穩(wěn)定的合作關(guān)系！
下載附件
上一篇：固定化細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域與核心優(yōu)勢(shì)及案例！
下一篇：確保食品微生物檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性的關(guān)鍵措施和具體要求！