微生物實(shí)驗(yàn)室菌落總數(shù)檢測中常見的錯(cuò)誤操作及影響分析！
小楊 / 2025-08-21 10:02:17
菌落總數(shù)檢測是微生物檢測中的基礎(chǔ)項(xiàng)目，常用于評估樣品的衛(wèi)生狀況，其結(jié)果的準(zhǔn)確性直接依賴規(guī)范操作。若操作不當(dāng)，會導(dǎo)致結(jié)果偏高或偏低，甚至完全失真。以下是菌落總數(shù)檢測中常見的錯(cuò)誤操作及影響分析：
一、樣品處理階段的錯(cuò)誤操作
1、取樣不具代表性
錯(cuò)誤表現(xiàn)：
隨意選取樣品（如僅取表面或局部，忽略整體均勻性）；
固體樣品未充分粉碎、均質(zhì)（如肉類、果蔬未用均質(zhì)器處理，導(dǎo)致微生物分布不均）；
液體樣品未搖勻（分層樣品如乳濁液、混懸液直接取樣）。
影響：結(jié)果無法反映樣品真實(shí)污染水平，可能偏高（取到高污染區(qū)域）或偏低（取到低污染區(qū)域）。
2、稀釋操作不規(guī)范
錯(cuò)誤表現(xiàn)：
稀釋液體積不準(zhǔn)確（如應(yīng)取 1mL 樣品到 9mL 稀釋液，實(shí)際取 1.5mL）；
稀釋時(shí)未充分混勻（僅簡單攪拌，未用漩渦混合器或手搖 10-20 次）；
稀釋梯度混亂（如從 10?¹ 直接跳到 10?³，跳過中間梯度）；
吸管混用（同一吸管用于不同稀釋度，導(dǎo)致交叉污染）。
影響：稀釋倍數(shù)誤差，導(dǎo)致菌落數(shù)計(jì)算錯(cuò)誤（如實(shí)際稀釋 10?³，誤按 10?² 計(jì)算，結(jié)果偏大 10 倍）。
二、培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件的錯(cuò)誤操作
1、培養(yǎng)基制備不當(dāng)
錯(cuò)誤表現(xiàn)：
培養(yǎng)基配方錯(cuò)誤（如少加營養(yǎng)成分、瓊脂比例不當(dāng)）；
滅菌不徹底（高壓滅菌時(shí)間不足、溫度不夠，導(dǎo)致雜菌殘留）；
滅菌后處理不當(dāng)（如瓊脂培養(yǎng)基未及時(shí)分裝，冷卻凝固后重新融化次數(shù)過多，破壞營養(yǎng)成分）；
倒平板時(shí)溫度過高（>50℃，燙死部分微生物）或過低（<45℃，培養(yǎng)基提前凝固，導(dǎo)致菌落分布不均）。
影響：培養(yǎng)基營養(yǎng)不足或有雜菌，導(dǎo)致菌落生長不良、計(jì)數(shù)偏低，或出現(xiàn)雜菌干擾。
2、培養(yǎng)條件控制錯(cuò)誤
錯(cuò)誤表現(xiàn)：
培養(yǎng)溫度不當(dāng)（如應(yīng) 36±1℃培養(yǎng)，實(shí)際用 30℃或 40℃，影響微生物增殖速度）；
培養(yǎng)時(shí)間不足或過長（標(biāo)準(zhǔn)為 48±2h，時(shí)間短則菌落未長成，時(shí)間過長則菌落重疊、蔓延）；
培養(yǎng)箱內(nèi)濕度不適（濕度過低導(dǎo)致培養(yǎng)基干裂，過高導(dǎo)致冷凝水滴落污染菌落）；
平板堆放過密（培養(yǎng)箱內(nèi)平板堆疊超過 5 層，中間平板散熱不良，溫度不均）。
影響：菌落數(shù)量偏少（溫度不適、時(shí)間不足）或難以計(jì)數(shù)（菌落重疊、蔓延）。
三、接種與計(jì)數(shù)階段的錯(cuò)誤操作
1、接種操作失誤
錯(cuò)誤表現(xiàn)：
傾注法中樣品與培養(yǎng)基混合不勻（倒入后未輕輕旋轉(zhuǎn)平板，導(dǎo)致菌落集中在邊緣或底部）；
涂布法中涂布器未滅菌或冷卻（灼燒后未冷卻直接接觸樣品，燙死微生物；或未滅菌導(dǎo)致雜菌污染）；
同一稀釋度只做 1 個(gè)平板（未做平行樣，結(jié)果偶然性大）。
影響：菌落分布不均，計(jì)數(shù)誤差大；平行樣缺失，無法驗(yàn)證結(jié)果可靠性。
2、計(jì)數(shù)規(guī)則執(zhí)行錯(cuò)誤
錯(cuò)誤表現(xiàn)：
計(jì)數(shù)時(shí)忽略“選擇菌落數(shù)在 30-300 CFU 之間的平板”原則（如選取菌落數(shù) 500 的平板計(jì)數(shù)，因菌落重疊導(dǎo)致結(jié)果偏高）；
誤將氣泡、雜質(zhì)當(dāng)作菌落計(jì)數(shù)；
漏計(jì)邊緣或瓊脂底部的菌落；
多個(gè)菌落連在一起時(shí)，未按“一個(gè)菌落團(tuán)計(jì)為一個(gè)菌落”的規(guī)則（如將蔓延的菌落團(tuán)拆分成多個(gè)計(jì)數(shù)）。
影響：計(jì)數(shù)結(jié)果偏高或偏低，不符合檢測標(biāo)準(zhǔn)。
四、器具與環(huán)境的錯(cuò)誤操作
1、器具滅菌不徹底
錯(cuò)誤表現(xiàn)：
培養(yǎng)皿、吸管、稀釋液容器未徹底滅菌（如干熱滅菌溫度不夠、時(shí)間不足）；
滅菌后的器具被二次污染（如無菌操作臺未紫外消毒、操作時(shí)手接觸器具內(nèi)壁）。
影響：引入外源雜菌，導(dǎo)致結(jié)果偏高（假陽性）。
2、操作環(huán)境不潔
錯(cuò)誤表現(xiàn)：
在普通實(shí)驗(yàn)臺而非無菌操作臺操作；
操作時(shí)未戴無菌手套、口罩，說話或咳嗽對著樣品；
實(shí)驗(yàn)臺未用 75% 酒精消毒，周圍環(huán)境有揚(yáng)塵。
影響：環(huán)境中的微生物污染樣品，導(dǎo)致菌落數(shù)虛高。
五、總結(jié)
菌落總數(shù)檢測的每一步操作都需嚴(yán)格遵循標(biāo)準(zhǔn)（如 GB 4789.2-2022《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 菌落總數(shù)測定》），任何環(huán)節(jié)的疏忽都可能導(dǎo)致結(jié)果失真。實(shí)際操作中，需重點(diǎn)關(guān)注樣品代表性、稀釋準(zhǔn)確性、培養(yǎng)基質(zhì)量、培養(yǎng)條件一致性及計(jì)數(shù)規(guī)范性，同時(shí)做好器具滅菌和環(huán)境清潔，以確保檢測結(jié)果的可靠性。
北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司擁有對菌種、細(xì)胞、培養(yǎng)基、配套試劑等產(chǎn)品需求者的極優(yōu)質(zhì)服務(wù)，對購買項(xiàng)目的前期資料提供,中期合同保證,后期貨物跟蹤到最終售后的確保項(xiàng)目準(zhǔn)確到位，都有相關(guān)人士進(jìn)行維護(hù),確保您在
微生物菌種查詢網(wǎng)中獲得最優(yōu)質(zhì)服務(wù)！也正因?yàn)榇?，北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司與國內(nèi)外多家研制單位、生物制藥、第三方檢測機(jī)構(gòu)和科研院所院校、化工企業(yè)有著良好、長期和穩(wěn)定的合作關(guān)系！
下載附件
上一篇：動物實(shí)驗(yàn)室建設(shè)需要遵循的核心標(biāo)準(zhǔn)和注意事項(xiàng)及應(yīng)急維護(hù)！
下一篇：環(huán)境監(jiān)測和環(huán)境檢測在具體應(yīng)用場景上有哪些不同？