微生物倒平板操作過(guò)程中避免出現(xiàn)氣泡的操作與方法！
小楊 / 2025-08-28 10:32:08
百歐博偉生物：在微生物倒平板操作中，氣泡的產(chǎn)生會(huì)影響后續(xù)菌落觀察（如氣泡處菌落形態(tài)變形）和接種準(zhǔn)確性，需從“倒皿前準(zhǔn)備、倒皿過(guò)程控制、倒皿后處理”三個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)針對(duì)性規(guī)避，具體方法如下：
一、倒皿前：從源頭減少氣泡產(chǎn)生條件
氣泡的核心來(lái)源是“培養(yǎng)基中混入空氣”或“倒皿時(shí)空氣卷入”，前期準(zhǔn)備需先排除空氣殘留：
1、培養(yǎng)基融化后充分消泡
若培養(yǎng)基（如滅菌后從水浴鍋取出）中已有肉眼可見(jiàn)氣泡，需先靜置 1-2 分鐘（在超凈臺(tái)內(nèi)、保持 50-60℃溫度），讓氣泡自然上浮至液面并破裂；
若氣泡較多，可輕輕傾斜錐形瓶（避免劇烈晃動(dòng)），用無(wú)菌移液器吸頭刺破表面氣泡（僅限超凈臺(tái)內(nèi)無(wú)菌操作），或用酒精燈火焰快速掠過(guò)液面（利用溫度差使氣泡破裂，注意火焰不可接觸瓶口，防止培養(yǎng)基濺出）。
2、確保培養(yǎng)皿無(wú)“隱性空氣”
一次性無(wú)菌培養(yǎng)皿開(kāi)封后，避免用力甩動(dòng)或快速開(kāi)蓋（防止空氣快速涌入皿內(nèi)形成渦流，殘留微小氣泡）；
玻璃培養(yǎng)皿滅菌后，需在超凈臺(tái)內(nèi)自然冷卻至室溫（避免冷熱不均導(dǎo)致皿內(nèi)空氣收縮 / 膨脹，形成氣泡），且倒皿前需確認(rèn)皿底干燥（若有殘留水珠，倒培養(yǎng)基后易與培養(yǎng)基混合形成氣泡）。
二、倒皿中：精準(zhǔn)控制操作細(xì)節(jié)，避免空氣卷入
倒皿過(guò)程是氣泡產(chǎn)生的“高發(fā)階段”，需通過(guò)“控流速、控角度、控動(dòng)作”三大要點(diǎn)規(guī)避：
1、控制培養(yǎng)基流速：慢倒不沖擊
手持錐形瓶時(shí)，瓶口需貼近培養(yǎng)皿蓋的縫隙（距離皿底不超過(guò) 1cm），緩慢傾倒培養(yǎng)基，流速以“每秒 1-2mL”為宜（約 15-20mL 培養(yǎng)基倒 3-5 秒），避免流速過(guò)快沖擊皿底，導(dǎo)致空氣被卷入培養(yǎng)基中形成氣泡；
若倒皿中途需暫停（如調(diào)整皿位），需先將錐形瓶瓶口離開(kāi)皿蓋，再停止傾倒（避免培養(yǎng)基在瓶口殘留，重新倒時(shí)形成“液滴沖擊”產(chǎn)生氣泡）。
2、控制錐形瓶角度：傾斜不垂直
倒皿時(shí)錐形瓶需保持45°-60°傾斜角（而非垂直向下），讓培養(yǎng)基沿皿蓋縫隙緩慢流入皿底，沿皿底邊緣自然鋪展（垂直傾倒時(shí)，培養(yǎng)基直接沖擊皿底中心，易激起空氣形成氣泡）；
避免錐形瓶瓶口完全伸入皿內(nèi)（防止瓶口外壁接觸皿蓋或皿底，污染培養(yǎng)基），僅需讓瓶口“對(duì)準(zhǔn)縫隙、不接觸皿體”即可。
3、控制培養(yǎng)皿狀態(tài)：平穩(wěn)不晃動(dòng)
倒皿時(shí)需將培養(yǎng)皿平放在超凈臺(tái)臺(tái)面（確保臺(tái)面水平，可提前用水平儀校準(zhǔn)），避免手持培養(yǎng)皿倒液（手持易導(dǎo)致皿體傾斜，培養(yǎng)基流動(dòng)不均，卷入空氣）；
倒完培養(yǎng)基后，蓋蓋動(dòng)作需輕緩（避免快速蓋蓋時(shí)空氣被壓入皿內(nèi)，形成新氣泡）。
三、倒皿后：及時(shí)處理已產(chǎn)生的微小氣泡
若倒皿后發(fā)現(xiàn)平板內(nèi)仍有少量微小氣泡（非大量密集氣泡），可通過(guò)以下方法補(bǔ)救，避免影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)：
1、輕微氣泡：敲擊消泡
蓋好皿蓋后，用手指輕輕敲擊平板邊緣（垂直方向，力度以培養(yǎng)基不晃動(dòng)為宜），利用震動(dòng)讓微小氣泡上浮至培養(yǎng)基表面，待其自然破裂（注意不可用力晃動(dòng)平板，否則氣泡會(huì)擴(kuò)散或與其他氣泡融合成大氣泡）。
2、貼壁氣泡：推壓消泡
若氣泡貼在皿壁或皿底，可戴無(wú)菌手套，用手指輕輕按壓皿蓋對(duì)應(yīng)氣泡的位置（力度需極輕，僅讓培養(yǎng)基輕微形變），將氣泡推向平板中心，使其上浮破裂（注意不可按壓過(guò)猛，避免培養(yǎng)基破裂或污染）。
3、無(wú)法消除的大氣泡：標(biāo)記規(guī)避
若平板內(nèi)出現(xiàn)直徑 > 5mm 的大氣泡（無(wú)法通過(guò)上述方法消除），需用記號(hào)筆在皿底標(biāo)記氣泡位置，后續(xù)接種時(shí)避開(kāi)該區(qū)域（氣泡處培養(yǎng)基厚度不均，菌落生長(zhǎng)易畸形，且觀察時(shí)易誤判為污染）。
四、常見(jiàn)“氣泡誤區(qū)”避坑
誤區(qū) 1：倒皿后快速晃動(dòng)平板“消泡”
錯(cuò)誤原因：快速晃動(dòng)會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基劇烈流動(dòng)，反而將空氣卷入形成更多氣泡，且可能讓培養(yǎng)基接觸皿蓋（導(dǎo)致污染）；
正確做法：僅在倒完后緩慢水平旋轉(zhuǎn)平板（1-2 圈，幅度以培養(yǎng)基不接觸皿蓋為宜），目的是讓培養(yǎng)基均勻鋪展，而非消泡。
誤區(qū) 2：培養(yǎng)基溫度過(guò)低（<50℃）倒皿“減少氣泡”
錯(cuò)誤原因：溫度過(guò)低會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基黏稠度升高，倒皿時(shí)流速更難控制，反而易形成“拉絲狀”流動(dòng)，卷入空氣；且低溫培養(yǎng)基易快速凝固，氣泡被封在內(nèi)部無(wú)法上?。?/div>
正確做法：始終保持培養(yǎng)基溫度在50-60℃（溫?zé)岵粻C手），此時(shí)培養(yǎng)基黏稠度適中，流動(dòng)性好，氣泡易自然上浮。
通過(guò)以上步驟，可將平板氣泡發(fā)生率降至最低，確保后續(xù)微生物培養(yǎng)、分離實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。若氣泡問(wèn)題反復(fù)出現(xiàn)，需重點(diǎn)檢查“培養(yǎng)基流速控制”和“倒皿時(shí)錐形瓶?jī)A斜角度”，這兩個(gè)是最易被忽略的關(guān)鍵細(xì)節(jié)。
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