標準化微生物采集方法的通用原則與常見場景及質量控制！
小楊 / 2025-09-16 10:09:28
百歐博偉生物：標準化的微生物采集方法是確保樣本中微生物種類、數量準確反映實際情況，避免污染或樣本失效，從而為后續(xù)檢測（如培養(yǎng)、鑒定、藥敏試驗等）提供可靠依據的核心流程。其核心原則包括無菌操作、樣本代表性、即時處理、規(guī)范記錄，不同類型的樣本（如環(huán)境、食品、人體臨床樣本）采集流程存在差異，以下將按常見場景分類詳解標準化方法。
一、核心通用原則（所有類型樣本采集均需遵守）
在具體采集前，需先明確并執(zhí)行以下通用規(guī)范，這是避免誤差的基礎：
1、無菌操作優(yōu)先：
采集人員需洗手、戴無菌手套（必要時穿無菌服、戴口罩 / 護目鏡），避免人體微生物污染樣本。
采集工具（如棉簽、離心管、培養(yǎng)皿、采樣勺）必須為無菌一次性產品，若重復使用（如金屬采樣器），需經高溫滅菌（121℃高壓蒸汽滅菌 20-30min）或干熱滅菌（160-180℃ 2-3h）。
打開采集容器 / 工具時，容器口、工具尖端避免接觸非無菌表面（如桌面、手、樣本外的其他物體）。
2、保證樣本代表性：
避免“單點采集”，需根據樣本特性選擇多個采集點（如環(huán)境樣本需覆蓋高風險區(qū)域：地面、設備表面、人員接觸部位；食品樣本需從不同批次、不同部位采集）。
采集量需符合檢測要求（如臨床痰樣本需≥1mL，食品樣本需≥25g，環(huán)境表面樣本需覆蓋 100cm² 區(qū)域），不足量可能導致檢測假陰性。
3、即時處理與保存：
樣本采集后需立即標注信息（樣本名稱、采集時間、地點、采集人、樣本類型），避免混淆。
若無法即時檢測，需按樣本類型選擇保存條件：
臨床樣本（如血液、腦脊液）：2-8℃冷藏（不超過 24h），避免冷凍（可能破壞微生物細胞）；
環(huán)境 / 食品樣本：若需運輸，使用帶冰袋的無菌保溫箱，保存時間不超過 48h；
需厭氧培養(yǎng)的樣本：采集后立即注入厭氧保存液（如庖肉培養(yǎng)基），隔絕空氣。
4、規(guī)范記錄：
記錄內容需包含：采集目的（如“檢測食品中
沙門氏菌”“環(huán)境消毒后微生物殘留監(jiān)測”）、樣本背景（如食品批次號、環(huán)境消毒方式）、采集過程（工具類型、采集區(qū)域）、保存條件及運輸時間，確保可追溯。
二、常見場景的標準化采集方法
（一）環(huán)境微生物采集（如車間、實驗室、公共場所）
目標：檢測環(huán)境表面（如桌面、設備、地面）或空氣的微生物負荷（如菌落總數）。
1、采集類型
表面涂抹法（最常用）
工具準備
無菌棉簽、無菌生理鹽水（或緩沖液）、無菌離心管（10mL）、無菌規(guī)格板（10cm×10cm，即 100cm²）
操作步驟
取無菌棉簽，蘸取少量無菌生理鹽水（濕潤即可，不滴水）；
將規(guī)格板固定在待采集表面，用棉簽在板內來回擦拭 5 次（橫向 3 次 + 縱向 2 次，確保覆蓋整個區(qū)域）；
擦拭后，將棉簽頭剪入無菌離心管，加入 5mL 無菌生理鹽水，振蕩 1min（使微生物洗脫）；
同一樣本需采集 3 個不同區(qū)域，合并洗脫液（或分別檢測后取平均值）。
注意事項
避免采集有明顯污漬、水漬的區(qū)域；
若表面干燥，需確保棉簽濕潤（避免微生物因干燥死亡）；
設備表面需先斷電，冷卻至室溫后采集。
2、采集類型
空氣沉降法
工具準備
無菌培養(yǎng)皿（如營養(yǎng)瓊脂平板）、培養(yǎng)皿架
操作步驟
根據環(huán)境面積確定采樣點（如 10m² 內設 3 個點，分別在房間四角 + 中心）；
打開培養(yǎng)皿蓋，將平板倒扣在培養(yǎng)皿架上，暴露 30min（讓空氣中微生物自然沉降到培養(yǎng)基表面）；
暴露后立即蓋好培養(yǎng)皿，標注信息，盡快送實驗室培養(yǎng)（37℃ 24-48h）。
注意事項
采樣時避免人員走動、通風（如關閉空調、門窗）；
培養(yǎng)皿需水平放置，避免培養(yǎng)基傾斜溢出；
僅適用于檢測空氣中的需氧菌，厭氧菌需專用空氣采樣器。
（二）食品微生物采集（如肉類、乳制品、果蔬）
（1）固體食品（如肉類、面包、蔬菜）
工具：無菌采樣勺 / 刀、無菌砧板、無菌均質袋、無菌生理鹽水（或緩沖蛋白胨水）、電子秤（無菌操作區(qū)使用）。
步驟：
采樣前，用 75% 酒精擦拭食品外包裝表面（去除表面污染，避免干擾內部樣本）；
拆開包裝，用無菌刀 / 勺從食品不同部位采集樣本（如肉類需取瘦肉、脂肪交界處，果蔬需取表皮和內部果肉，各部位取 5-10g），總采樣量≥25g；
將樣本放入無菌均質袋，加入 225mL 無菌稀釋液（如生理鹽水，按 1:10 比例稀釋，符合微生物檢測的稀釋要求）；
用均質器拍打均質袋（2000-3000rpm，30-60s），使樣本與稀釋液充分混合，制成“樣本勻漿”，用于后續(xù)檢測。
（2）液體食品（如牛奶、果汁、飲料）
工具：無菌吸管（10mL）、無菌離心管、無菌采樣瓶。
步驟：
若為密封包裝，用 75% 酒精擦拭瓶口，待酒精揮發(fā)后打開；
用無菌吸管吸取 10mL 液體，注入含 90mL 無菌稀釋液的離心管（1:10 稀釋），振蕩混勻；
若液體渾濁（如酸奶），需先輕輕搖勻后再采樣，避免沉淀影響微生物分布。
注意事項：
避免采集過期、變質或包裝破損的食品；
冷凍食品需先在 2-8℃解凍（不超過 18h），解凍后立即采樣，避免反復解凍；
高油 / 高糖食品（如油炸食品、果醬）需用專用稀釋液（如含吐溫 - 80 的生理鹽水），幫助微生物洗脫。
（三）人體臨床微生物采集（如血液、痰液、尿液，需專業(yè)醫(yī)護人員操作）
目標：檢測患者體內是否存在病原微生物，指導臨床用藥（如藥敏試驗），必須由醫(yī)護人員嚴格按無菌流程操作，避免交叉感染。
1、樣本類型
血液
核心采集流程
工具：一次性無菌采血針、無菌采血管（含抗凝劑）、75% 酒精棉球、碘伏棉球。
流程：
患者手臂消毒（碘伏擦拭 30s→酒精脫碘）；
靜脈穿刺采血（成人每次采 5-10mL，注入無菌采血管）；
輕輕顛倒采血管 5 次（避免血液凝固）。
關鍵注意事項
采血前需確認患者無抗凝劑過敏史；
采血管需標注“血液樣本 + 患者姓名 + 住院號 + 采血時間”；
2h 內送實驗室培養(yǎng)（需氧 + 厭氧雙份培養(yǎng)）。
2、樣本類型
痰液
核心采集流程
工具：無菌痰杯、生理鹽水（必要時）。
流程：
患者用生理鹽水漱口 3 次（去除口腔正常菌群污染）；
深咳嗽，將氣管深部的痰液咳出，收集至無菌痰杯（量≥1mL）；
若患者無法自主咳痰，需用無菌吸痰管（連接負壓吸引器）采集。
關鍵注意事項
避免采集“唾液”（唾液中含大量口腔細菌，會干擾檢測結果）；
采集后 1h 內送檢，若延遲需 2-8℃冷藏（不超過 24h）。
3、樣本類型
尿液
核心采集流程
工具：無菌尿杯、無菌離心管。
流程：
患者清潔外陰（女性：從前向后擦拭；男性：翻開包皮擦拭）；
留取“中段尿”（先排尿 50mL 棄去，再留取中間部分尿液，約 10-20mL）；
立即將尿液倒入無菌離心管，密封送檢。
關鍵注意事項
中段尿可減少外陰皮膚細菌污染；
采集后 2h 內送檢，若延遲需加入防腐劑（如硼酸，需專業(yè)人員操作）。
三、采集后質量控制（避免樣本失效）
運輸條件：
樣本需用無菌、密封的容器裝放，避免運輸過程中泄漏或污染；
需冷藏的樣本（如血液、痰液）需用帶冰袋的保溫箱（溫度控制在 2-8℃），避免溫度波動（如夏季避免陽光直射，冬季避免冷凍）。
檢測時效性：
大部分微生物樣本需在采集后24h 內完成檢測（如環(huán)境樣本、食品樣本）；
臨床樣本（如血液、腦脊液）需“緊急送檢”（1h 內），避免病原微生物因長時間保存而死亡（如腦膜炎奈瑟菌對溫度敏感，延遲送檢易導致假陰性）。
空白對照：
每次采集需同時設置“空白對照”（如用無菌生理鹽水浸泡的棉簽，按相同流程處理但不接觸樣本，同步送檢），若空白對照培養(yǎng)出細菌，則說明采集過程存在污染，本次樣本檢測結果無效，需重新采集。
四、總結
標準化微生物采集的核心是“無菌 + 代表性 + 時效性”：
無菌操作是避免外源污染的關鍵；
樣本代表性決定檢測結果是否能反映真實情況；
即時處理與規(guī)范運輸是確保微生物存活、不降解的基礎。
不同場景的采集方法需結合樣本特性（如固體 / 液體、需氧 / 厭氧）調整，但均需嚴格遵守通用原則，并做好全程記錄，確保檢測結果的準確性和可追溯性。
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