微生物細(xì)胞大小的測(cè)定和顯微鏡直接計(jì)數(shù)法的核心差異！
小楊 / 2025-09-29 09:50:03
百歐博偉生物：微生物細(xì)胞大小測(cè)定常用顯微測(cè)微尺法，顯微鏡直接計(jì)數(shù)則多采用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板法，兩者均需結(jié)合光學(xué)顯微鏡操作。
一、微生物細(xì)胞大小的測(cè)定（以顯微測(cè)微尺法為例）
該方法核心是通過目鏡測(cè)微尺與鏡臺(tái)測(cè)微尺的校準(zhǔn)，將目鏡刻度轉(zhuǎn)化為實(shí)際長(zhǎng)度，再測(cè)量細(xì)胞。
1、核心工具
鏡臺(tái)測(cè)微尺：標(biāo)準(zhǔn)刻度尺，總長(zhǎng) 1mm，分為 100 小格，每小格實(shí)際長(zhǎng)度為 10μm，用于校準(zhǔn)。
目鏡測(cè)微尺：可放入目鏡的圓形玻片，刻有 50 或 100 小格，無(wú)實(shí)際長(zhǎng)度，需校準(zhǔn)后使用。
2、操作步驟
安裝測(cè)微尺：將目鏡測(cè)微尺放入目鏡，鏡臺(tái)測(cè)微尺放在顯微鏡載物臺(tái)中央。
校準(zhǔn)刻度：先用低倍鏡找到鏡臺(tái)測(cè)微尺刻度，再換高倍鏡或油鏡，使兩測(cè)微尺刻度對(duì)齊，記錄重合刻度的格數(shù)，計(jì)算目鏡測(cè)微尺每小格實(shí)際長(zhǎng)度（公式：目鏡每小格長(zhǎng)度 = 鏡臺(tái)測(cè)微尺重合格數(shù) ×10μm÷ 目鏡測(cè)微尺重合格數(shù)）。
測(cè)量細(xì)胞：移走鏡臺(tái)測(cè)微尺，放置微生物樣品，用目鏡測(cè)微尺測(cè)量細(xì)胞的長(zhǎng)、寬，記錄格數(shù)，結(jié)合校準(zhǔn)后的數(shù)值計(jì)算實(shí)際大小。
3、注意事項(xiàng)
不同放大倍數(shù)需單獨(dú)校準(zhǔn)，放大倍數(shù)越高，目鏡測(cè)微尺每小格實(shí)際長(zhǎng)度越小。
測(cè)量時(shí)需選取 10-20 個(gè)細(xì)胞取平均值，減少誤差。
二、顯微鏡直接計(jì)數(shù)（以血細(xì)胞計(jì)數(shù)板法為例）
1、核心工具：血細(xì)胞計(jì)數(shù)板
計(jì)數(shù)板為特制載玻片，有兩個(gè)計(jì)數(shù)室，每個(gè)計(jì)數(shù)室容積為 0.1mm³（即 10??mL），常見規(guī)格為 25×16 型（25 個(gè)中格，每中格 16 個(gè)小格）或 16×25 型（16 個(gè)中格，每中格 25 個(gè)小格）。
2、操作步驟
樣品制備：將微生物培養(yǎng)液稀釋至合適濃度（一般每小格含 1-2 個(gè)細(xì)胞，避免重疊）。
加樣：取干凈計(jì)數(shù)板，蓋上蓋玻片，用吸管吸取稀釋后的樣品，從蓋玻片邊緣滴加，讓樣品自行滲入計(jì)數(shù)室，靜置 5-10 分鐘。
計(jì)數(shù)：用高倍鏡觀察，計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)室中 4 個(gè)角和中央共 5 個(gè)中格的細(xì)胞數(shù)（25×16 型），或 4 個(gè)角的 4 個(gè)中格細(xì)胞數(shù)（16×25 型），注意邊緣細(xì)胞只計(jì)“計(jì)上不計(jì)下、計(jì)左不計(jì)右”。
計(jì)算數(shù)量：公式為“每 mL 菌液細(xì)胞數(shù) = 5 個(gè)中格總細(xì)胞數(shù) ×5（或 4）× 稀釋倍數(shù) ×10?”（×10?是將 0.1mm³ 換算為 1mL）。
3、注意事項(xiàng)
樣品需充分搖勻，避免細(xì)胞沉淀導(dǎo)致計(jì)數(shù)偏差。
若細(xì)胞重疊或數(shù)量過多 / 過少，需重新調(diào)整稀釋倍數(shù)。
該方法計(jì)數(shù)的是活菌和死菌總數(shù)，無(wú)法區(qū)分死活細(xì)胞。
三、兩種方法的核心差異
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