配制霉菌液體培養(yǎng)基時(shí)需要注意的無菌操作要點(diǎn)有哪些？
小楊 / 2025-10-31 09:30:50
百歐博偉生物：配制霉菌液體培養(yǎng)基的過程中，無菌操作是避免雜菌（如細(xì)菌、酵母菌、其他霉菌）污染的關(guān)鍵，直接影響培養(yǎng)結(jié)果的準(zhǔn)確性。以下是需要重點(diǎn)注意的無菌操作要點(diǎn)：
一、實(shí)驗(yàn)環(huán)境的無菌準(zhǔn)備
1、超凈工作臺(tái)的使用
操作前 30 分鐘開啟超凈工作臺(tái)的紫外燈和風(fēng)機(jī)，對(duì)臺(tái)面及周圍環(huán)境進(jìn)行滅菌（紫外燈照射時(shí)間不超過 1 小時(shí)，避免臭氧過度積累）。
操作時(shí)關(guān)閉紫外燈，僅保留風(fēng)機(jī)運(yùn)行，通過層流空氣防止外界污染物進(jìn)入。
工作臺(tái)面需用 75% 酒精擦拭消毒，避免殘留水跡或雜質(zhì)。
2、實(shí)驗(yàn)區(qū)域清潔
操作臺(tái)面僅放置必需物品（如培養(yǎng)基、接種工具、菌種），無關(guān)物品（如書本、手機(jī)）需移至工作臺(tái)外，減少污染風(fēng)險(xiǎn)。
實(shí)驗(yàn)前用酒精消毒雙手及操作工具，避免手部微生物污染。
二、培養(yǎng)基制備過程中的無菌控制
1、配料與溶解階段
稱量試劑的容器需提前清洗干凈并干燥，避免殘留雜質(zhì)或微生物（必要時(shí)可高壓滅菌）。
溶解用水需為蒸餾水或去離子水，避免自來水含有的微生物或礦物質(zhì)干擾。
2、分裝與封口
分裝培養(yǎng)基的容器需提前清洗、滅菌（121℃高壓滅菌 20 分鐘），確保無殘留微生物。
分裝時(shí)避免培養(yǎng)基沾到瓶口或瓶壁（若沾到需用酒精棉球擦拭干凈），防止滅菌后瓶口滋生雜菌。
瓶口需用滅菌的棉塞（或透氣封口膜）密封，棉塞需松緊適宜（過松易污染，過緊影響通氣），且需經(jīng)干熱滅菌（160-170℃，2-3 小時(shí)）處理。
3、滅菌操作
采用高壓蒸汽滅菌：121℃、103.4kPa（1.05kg/cm²）條件下滅菌 15-20 分鐘（根據(jù)培養(yǎng)基體積調(diào)整，體積越大時(shí)間可適當(dāng)延長）。
滅菌后需將培養(yǎng)基迅速冷卻至室溫（可置于無菌環(huán)境中自然冷卻），避免長時(shí)間高溫導(dǎo)致營養(yǎng)成分破壞，同時(shí)防止冷卻過程中空氣中的微生物沉降污染。
滅菌后的培養(yǎng)基需檢查是否滅菌徹底，若發(fā)現(xiàn)異常需重新制備。
三、接種過程中的核心無菌操作
1、接種工具的滅菌
接種環(huán)、接種針等需在酒精燈火焰上灼燒滅菌（先燒紅金屬部分，再燒柄部，避免驟冷炸裂），冷卻后再接觸菌種或培養(yǎng)基（避免高溫殺死霉菌孢子）。
移液槍的槍頭需使用無菌一次性槍頭，避免重復(fù)使用導(dǎo)致交叉污染。
2、菌種接種的規(guī)范
菌種（如霉菌孢子斜面、平板）需在超凈工作臺(tái)內(nèi)打開，瓶口或平板蓋僅打開一條縫隙（避免完全暴露在空氣中），操作完成后迅速蓋緊。
接種時(shí)，將霉菌孢子或菌絲片段接入液體培養(yǎng)基后，立即蓋緊瓶口的棉塞或封口膜，減少操作時(shí)間。
若使用冷凍保存的菌種，解凍后需在無菌環(huán)境中接種，避免反復(fù)凍融導(dǎo)致污染。
3、避免操作失誤
接種過程中，瓶口、接種工具避免接觸工作臺(tái)面、手或其他非無菌區(qū)域。
若培養(yǎng)基瓶口不慎接觸到非無菌物體，需用 75% 酒精擦拭后再封口。
四、滅菌后培養(yǎng)基的保存與檢查
1、保存條件
滅菌后的培養(yǎng)基需在無菌環(huán)境中存放，短期（1-2 周）可置于 4℃冰箱冷藏，長期保存需分裝后冷凍（但液體培養(yǎng)基冷凍可能導(dǎo)致成分析出，建議現(xiàn)配現(xiàn)用）。
存放時(shí)需標(biāo)記配制日期和滅菌時(shí)間，避免使用過期培養(yǎng)基。
2、污染檢查
接種前需觀察培養(yǎng)基是否有污染跡象：如出現(xiàn)渾濁、絮狀沉淀、顏色異常（如細(xì)菌污染可能呈乳白色渾濁，酵母菌污染可能產(chǎn)生氣泡），若有污染需廢棄并重新制備。
五、其他注意事項(xiàng)
霉菌的特殊性：霉菌孢子易通過空氣傳播，操作時(shí)需避免劇烈動(dòng)作，防止孢子擴(kuò)散污染其他實(shí)驗(yàn)材料。
實(shí)驗(yàn)后處理：接種完成后，需及時(shí)清理工作臺(tái)面（用酒精擦拭），廢棄的菌種或污染培養(yǎng)基需高壓滅菌后再處理，避免環(huán)境污染。
通過嚴(yán)格執(zhí)行以上無菌操作，可最大程度減少雜菌污染風(fēng)險(xiǎn)，確保霉菌液體培養(yǎng)的純度和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。
北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司擁有對(duì)菌種、細(xì)胞、培養(yǎng)基、配套試劑等產(chǎn)品需求者的極優(yōu)質(zhì)服務(wù)，對(duì)購買項(xiàng)目的前期資料提供,中期合同保證,后期貨物跟蹤到最終售后的確保項(xiàng)目準(zhǔn)確到位，都有相關(guān)人士進(jìn)行維護(hù),確保您在
微生物菌種查詢網(wǎng)中獲得最優(yōu)質(zhì)服務(wù)！也正因?yàn)榇?，北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司與國內(nèi)外多家研制單位、生物制藥、第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)和科研院所院校、化工企業(yè)有著良好、長期和穩(wěn)定的合作關(guān)系！
下載附件
上一篇：冷凍真空干燥法的工作原理與操作步驟及優(yōu)缺點(diǎn)與應(yīng)用領(lǐng)域！
下一篇：微生物檢測(cè)中，哪些因素會(huì)影響純凈水的檢測(cè)結(jié)果？