首次利用精原干細胞獲轉基因樹鼩
中國微生物菌種查詢網(wǎng) 來源：生物通 / 2016-12-28 08:20:01
研究人員首次建立的樹鼩精原干細胞體外培養(yǎng)體系，并利用體外培養(yǎng)的樹鼩精原干細胞成功獲得世界首只轉基因樹鼩，實現(xiàn)了樹鼩基因修飾技術的重大突破。
樹鼩是一種具有重要潛在應用價值的實驗動物。相較于嚙齒類實驗動物，樹鼩在遺傳進化地位及生理生化特征上均更接近于靈長類。并且，樹鼩相比于靈長類動物在生物醫(yī)學研究中有著諸多優(yōu)勢，包括體型小、生殖周期短、飼養(yǎng)成本低等。然而，缺乏遺傳操作手段嚴重制約了樹鼩作為實驗動物的廣泛應用和推廣。由于樹鼩早期胚胎收集和胚胎移植技術的難題目前均未解決，通過樹鼩精原干細胞進行遺傳修飾，可為樹鼩遺傳操作另辟蹊徑。
在昆明動物所研究員鄭萍等的指導下，博士研究生李朝暉等首先成功篩選到細胞表面標記分子Thy1可用于富集樹鼩睪丸中的精原干細胞，并發(fā)現(xiàn)Wnt/?-catenin信號通路及樹鼩睪丸支持細胞對于精原干細胞維持其增殖及干細胞特征至關重要，據(jù)此改善了樹鼩精原干細胞體外擴增培養(yǎng)體系，并建立了多株可長期穩(wěn)定傳代培養(yǎng)的樹鼩精原干細胞系（圖A）。這些體外長期培養(yǎng)的樹鼩精原干細胞可穩(wěn)定表達外源基因（圖B），也可以利用CRISPR-Cas9進行基因編輯?；蛐揎椇蟮臉潼毦杉毎浦驳浇?jīng)白消安處理的雄性受體樹鼩睪丸內，可以產(chǎn)生基因修飾精子，通過自然交配從而獲得基因修飾子代樹鼩（圖C、D）。
A. 培養(yǎng)40代的樹鼩精原干細胞系；
B. 穩(wěn)定表達綠色熒光蛋白（GFP）的樹鼩精原干細胞；
C. 基因修飾精原干細胞移植到受體睪丸中；
D. 左邊為表達GFP的轉基因樹鼩。