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微生物組學(xué)實(shí)驗(yàn)中樣品需要低溫凍存保存劑嗎?
中國微生物菌種查詢網(wǎng) / 2018-07-16 15:48:51

        對于樣品的保存,低溫凍存保護(hù)可能有助于樣品的保存。在比較儲存樣品和新鮮樣品中的微生物組成之前,可以采用一種快速的方法,來評估保護(hù)劑的作用,那就是檢測一下樣品DNA的量,如果DNA量不足,那么你采用的方法也許并不適用于這種微生物的保存。
       RNAlater最初是作為一種RNA保存劑,由Qiagen和Thermo Fisher等廠家開發(fā)出來的,現(xiàn)在也可以用于保存DNA。
        RNAlater是特殊的樣品儲存液,只要在采樣后立即將新鮮樣品浸入這種液體試劑,RNlater可以迅速滲透到組織或其他生物樣本中,穩(wěn)定并保護(hù)RNA完整而不被降解,確保下游分析得到的數(shù)據(jù)真實(shí)反應(yīng)樣品的表達(dá)信息。
人類微生物組計劃(Human Microbiome Project)的參與研究人員,來自哈佛大學(xué)的計算生物學(xué)家Curtis Huttenhower與他的同事們發(fā)現(xiàn)在樣品收集后,如果沒有冰箱,那么可以加入這種保護(hù)劑使用。
        不過一些用戶也報告了RNAlater的缺陷,雖然RNAlater可以用于樣品運(yùn)輸,但是這種保護(hù)劑會降低Bacteroidetes和Ruminococcaceae兩種細(xì)菌新鮮提取后的菌群數(shù)量。另外就是如果想獲得樣品高RNA產(chǎn)量,那么就必須先將其去除。Ganz表示,“RNAlater會妨礙樣品正常形成顆粒沉淀,因此在去除RNAlater之后,還必須磷酸鹽緩沖液進(jìn)行清洗?!?br />         此外,Woods Hole海洋研究所海洋生物化學(xué)家Mak Saito也指出,RNAlater還有一個問題,那就是其高鹽含量,因此在一些實(shí)驗(yàn)中會令樣品清洗成為問題。Saito曾采用這種溶液保存海洋微生物組中的蛋白組成。
        對于一些類型的實(shí)驗(yàn)樣品來說,如果加入低溫凍存保護(hù)劑就會大幅度改變微生物組成,這樣做劃不來,比如土壤樣品。而對糞便樣品而言,有時低溫凍存也許并不合適,比如說,用于治療艱難梭菌感染的樣品能在室溫下保存長達(dá)6個小時,而且還不會引起治療療效發(fā)生顯著變化。
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