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ATCC菌種的制備和傳代.
1,先將復(fù)活后經(jīng)過性能確認的菌株的斜面培養(yǎng)物,用0.85%的滅菌生理鹽水0.5ml洗斜面菌苔成菌懸液
將上述菌懸液吸入滅菌管中,加入0.5ml40%的滅菌甘油,混勻,密封。保藏溫度為—18℃。
2,由凍干或超低溫保存的標準儲備菌株經(jīng)一次傳代得到的菌株。工作菌株不宜再傳代,工作菌株使用和儲存過程中嚴格遵守無菌操作,即不存在交叉污染,又可以多次使用。保藏溫度為4-6℃。
標準儲備菌株對多向下傳三代。過多的傳種會增加變異的機會。標準儲備菌株根據(jù)菌種特點選擇適宜的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件進行培養(yǎng)18-24h即工作標準菌株。儲存在2-8℃,可放四周。個別營養(yǎng)要求高的為2周.
3,制備好的菌株應(yīng)由室主任統(tǒng)一編號,標識,專人專柜保藏。
4,在確認菌株的性能 檢查它的純度和形態(tài) ,菌落形態(tài)取復(fù)活后的培養(yǎng)物,在相應(yīng)的鑒別平板或非選擇平板上劃線分離,培養(yǎng)出單菌落,觀察菌落形態(tài)是否符合該菌株要求,同一平板上的單菌落大小,形狀、顏色、質(zhì)地、光澤是否相似,對于出現(xiàn)兩種以上形態(tài)的菌株,應(yīng)再分別挑取單菌落劃線,檢測是否出現(xiàn)相同特征。
ATCC菌種的制備和傳代,標準儲備菌株就是在經(jīng)多次傳代后制備的多份相同的菌株。