關(guān)于游泳池水中大腸桿菌群的測定方法及標(biāo)準(zhǔn)出自:中國微生物菌種查詢--ATCC菌種
一、濾膜法
1、濾膜滅菌:將濾膜放入含蒸餾水的燒杯中,煮沸滅菌三次,每次15min,前兩次煮沸后需更換水洗滌2~3次,以除去殘留溶劑。
2、濾膜滅菌:用121℃高壓滅菌20min或用點燃的酒精棉球火焰滅菌。
3、水樣過濾:用無菌鑷子夾取滅菌濾膜邊緣部分,將粗糙面向上,貼放在濾床上,固定好濾器,將100ml水樣(如水樣含菌數(shù)較多,可減少濾水樣或?qū)⑺畼酉♂專┳⑷霝V器中,打開濾器閥門,在一0.5×105 Pa(-0.5大氣壓)下抽濾。
4、培養(yǎng):水樣濾完后,再抽氣約5s,關(guān)上濾器閥門,取下濾器,用滅菌鑷子夾取濾膜邊緣部分,移放在乳糖瓊脂分離培養(yǎng)基上,濾膜截留細菌面向上,濾膜應(yīng)與培養(yǎng)基完全貼緊,兩者之間不得留有氣泡,然后將平皿倒置,放入36℃±1℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)18~24h。
5、挑取濾膜上符合下列特征的菌落進行革蘭氏染色,鏡檢。
紫紅色,具有金屬光澤的菌落;
深紅色,不帶或略帶金屬光澤的菌落;
淡紅色,中心色較深的菌落。
6、將革蘭氏染色為陰性的無芽孢桿菌接種到乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中,于36℃±1℃培養(yǎng)48h,產(chǎn)酸產(chǎn)氣者證實為大腸菌群陽性。
7、計算濾膜上生長的證實為大腸菌群的菌落數(shù),在乘以10即為每1000ml水樣中的大腸菌群數(shù)。
二、多管發(fā)酵法
伊紅美藍瓊脂
革蘭氏染色液
推測性試驗
培養(yǎng)基和試劑
乳糖蛋白胨培養(yǎng)液
1、在2個裝有50ml三倍濃縮乳糖膽鹽培養(yǎng)液的大試管或燒杯內(nèi)個加入水樣100ml。
2、在10支裝有5ml三倍濃縮乳糖膽鹽培養(yǎng)液的試管中各加入水樣10ml。
3、輕搖試管使液體充分混勻,置36℃±1℃培養(yǎng)箱中,培養(yǎng)24h。
4、觀察每管是否產(chǎn)氣,如果不產(chǎn)氣則報告為大腸菌群陰性;反之則推測性試驗陽性,需做進一步的證實試驗。
證實試驗
1、平板分離
自推測性試驗的陽性管中取一接種環(huán)培養(yǎng)液,接種到伊紅美藍瓊脂平板上,置于36℃±1℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)18~24h,觀察菌落形態(tài),典型的大腸菌群菌落為黑紫色或紅紫色,具有金屬光澤。
2、復(fù)發(fā)酵試驗
挑取可疑大腸菌群菌落1或2個進行革蘭氏染色,同時接種乳糖發(fā)酵管,于36℃±1℃培養(yǎng)箱中,培養(yǎng)24h。
3、凡乳糖發(fā)酵管最終產(chǎn)酸、產(chǎn)氣、革蘭氏染色為陰性的無芽孢桿菌,為大腸菌群陽性,記下證實試驗的陽性管數(shù),查總大腸菌群(MPN)檢索表得出1000ml水樣中大腸菌群的MPN值。