細胞轉(zhuǎn)染技術大比拼！
中國微生物菌種查詢網(wǎng) / 2019-05-16 09:06:35
細胞轉(zhuǎn)染的方法主要包括：人工脂質(zhì)體法、磷酸鈣法、DEAE-右旋糖苷法、電穿孔法、病毒轉(zhuǎn)導法等，上期詳解了細胞轉(zhuǎn)染常用的方法-脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的原理和步驟 等，今天做個細胞轉(zhuǎn)染技術大比拼，了解各種細胞轉(zhuǎn)染的方法優(yōu)缺點，再根據(jù)自己的實驗要求選擇理想的方法，獲得漂亮的實驗結(jié)果。
接下來，詳述一下幾種經(jīng)典細胞轉(zhuǎn)染的方法。
一、人工脂質(zhì)體法
帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物，進而可被細胞內(nèi)吞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染/瞬時性轉(zhuǎn)染。這種方法幾乎適用于所有細胞，轉(zhuǎn)染效率高、重復型好，但轉(zhuǎn)染時需要去除血清，轉(zhuǎn)染效果隨細胞類型變化大。
脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的原理與步驟：詳情
二、磷酸鈣法
通常穿了“隱身衣”核酸分子在“照妖鏡”磷酸鈣的作用下可形成“肉眼可見”的磷酸鈣-DNA共沉淀，可使共沉淀中濃縮DNA分子與細胞表面結(jié)合并通過內(nèi)吞作用進入細胞。該法可用于瞬時或穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。然而因其對pH、溫度和緩沖液鹽濃度的微小變化十分敏感，所得結(jié)果容易出現(xiàn)差異，且對許多類型的細胞培養(yǎng)物(尤其是原代細胞)具有細胞毒性，轉(zhuǎn)染效率較差。
三、DEAE-右旋糖苷法
常言道：同性相斥，異性相吸。因而，當帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸中帶負電的磷酸骨架相遇，妥妥的火花四射，而后會被細胞膜抱團相擁并通過細胞內(nèi)吞作用迎客到家。該法可用于瞬時轉(zhuǎn)染，操作相對簡單、結(jié)果可重復，但是對細胞有一定的毒副作用，且轉(zhuǎn)染時需要血清。
四、電穿孔法
有時，細胞有些“油鹽不進”，就是不開放門戶給核酸放行，此時各位小伙伴可采用一些強硬手段—電穿孔法。此法利用高脈沖電壓破壞細胞膜電位，使得DNA 通過膜上形成的小孔導入穩(wěn)定/瞬時性轉(zhuǎn)染，適用于所有類型的細胞，但細胞致死率高，DNA和細胞用量大，且需根據(jù)不同細胞類型優(yōu)化電穿孔實驗條件。
其他物理基因輸送法還包括基因槍、直接顯微注射等方式。前者又稱為粒子轟擊，可將包裹著核酸的顯微重金屬顆粒告訴射入受體細胞內(nèi)，適用于瞬時性轉(zhuǎn)染。該技術可需要昂貴的設備，且細胞死亡率較高。而后者則是通過精細的注射針將核酸送入胞漿中，一次只能輸送一個細胞中，適用于構(gòu)建轉(zhuǎn)基因動物或輸送人工染色體。
五、病毒轉(zhuǎn)導法
一般，病毒介導的轉(zhuǎn)染也稱之為轉(zhuǎn)導，它為難以轉(zhuǎn)染的細胞類型提供了一種方法，可用于蛋白質(zhì)過表達或抑制，是臨床研究中最常用的方法。它通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中，可用于難轉(zhuǎn)染細胞、原代細胞的穩(wěn)定性轉(zhuǎn)染。
