細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)大比拼！
中國(guó)微生物菌種查詢網(wǎng) / 2019-05-16 09:06:35
細(xì)胞轉(zhuǎn)染的方法主要包括：人工脂質(zhì)體法、磷酸鈣法、DEAE-右旋糖苷法、電穿孔法、病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)法等，上期詳解了細(xì)胞轉(zhuǎn)染常用的方法-脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的原理和步驟 等，今天做個(gè)細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)大比拼，了解各種細(xì)胞轉(zhuǎn)染的方法優(yōu)缺點(diǎn)，再根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)要求選擇理想的方法，獲得漂亮的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
接下來(lái)，詳述一下幾種經(jīng)典細(xì)胞轉(zhuǎn)染的方法。
一、人工脂質(zhì)體法
帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成復(fù)合物，進(jìn)而可被細(xì)胞內(nèi)吞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染/瞬時(shí)性轉(zhuǎn)染。這種方法幾乎適用于所有細(xì)胞，轉(zhuǎn)染效率高、重復(fù)型好，但轉(zhuǎn)染時(shí)需要去除血清，轉(zhuǎn)染效果隨細(xì)胞類型變化大。
脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的原理與步驟：詳情
二、磷酸鈣法
通常穿了“隱身衣”核酸分子在“照妖鏡”磷酸鈣的作用下可形成“肉眼可見(jiàn)”的磷酸鈣-DNA共沉淀，可使共沉淀中濃縮DNA分子與細(xì)胞表面結(jié)合并通過(guò)內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞。該法可用于瞬時(shí)或穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。然而因其對(duì)pH、溫度和緩沖液鹽濃度的微小變化十分敏感，所得結(jié)果容易出現(xiàn)差異，且對(duì)許多類型的細(xì)胞培養(yǎng)物(尤其是原代細(xì)胞)具有細(xì)胞毒性，轉(zhuǎn)染效率較差。
三、DEAE-右旋糖苷法
常言道：同性相斥，異性相吸。因而，當(dāng)帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸中帶負(fù)電的磷酸骨架相遇，妥妥的火花四射，而后會(huì)被細(xì)胞膜抱團(tuán)相擁并通過(guò)細(xì)胞內(nèi)吞作用迎客到家。該法可用于瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，操作相對(duì)簡(jiǎn)單、結(jié)果可重復(fù)，但是對(duì)細(xì)胞有一定的毒副作用，且轉(zhuǎn)染時(shí)需要血清。
四、電穿孔法
有時(shí)，細(xì)胞有些“油鹽不進(jìn)”，就是不開(kāi)放門戶給核酸放行，此時(shí)各位小伙伴可采用一些強(qiáng)硬手段—電穿孔法。此法利用高脈沖電壓破壞細(xì)胞膜電位，使得DNA 通過(guò)膜上形成的小孔導(dǎo)入穩(wěn)定/瞬時(shí)性轉(zhuǎn)染，適用于所有類型的細(xì)胞，但細(xì)胞致死率高，DNA和細(xì)胞用量大，且需根據(jù)不同細(xì)胞類型優(yōu)化電穿孔實(shí)驗(yàn)條件。
其他物理基因輸送法還包括基因槍、直接顯微注射等方式。前者又稱為粒子轟擊，可將包裹著核酸的顯微重金屬顆粒告訴射入受體細(xì)胞內(nèi)，適用于瞬時(shí)性轉(zhuǎn)染。該技術(shù)可需要昂貴的設(shè)備，且細(xì)胞死亡率較高。而后者則是通過(guò)精細(xì)的注射針將核酸送入胞漿中，一次只能輸送一個(gè)細(xì)胞中，適用于構(gòu)建轉(zhuǎn)基因動(dòng)物或輸送人工染色體。
五、病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)法
一般，病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染也稱之為轉(zhuǎn)導(dǎo)，它為難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞類型提供了一種方法，可用于蛋白質(zhì)過(guò)表達(dá)或抑制，是臨床研究中最常用的方法。它通過(guò)侵染宿主細(xì)胞將外源基因整合到染色體中，可用于難轉(zhuǎn)染細(xì)胞、原代細(xì)胞的穩(wěn)定性轉(zhuǎn)染。
