幾種測(cè)定化妝品菌落總數(shù)培養(yǎng)基的質(zhì)量比較！
小楊 / 2020-04-11 08:13:54
中國(guó)微生物菌種查詢網(wǎng)：隨著化妝品使用越來越廣泛。已成為人們?nèi)粘Ｉ钪械谋匦杵?。開展化妝品衛(wèi)生質(zhì)量監(jiān)測(cè)。是保障人民健康維護(hù)消費(fèi)者的利益，如使用了細(xì)菌總數(shù)超標(biāo)的化妝品。會(huì)導(dǎo)致皮膚感染 。因此，化妝品細(xì)菌總數(shù)測(cè)定是便于判明樣品被污染的程度。是對(duì)樣品進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)的重要依據(jù) 。按國(guó)家衛(wèi)生部頒布《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》，卵磷脂、吐溫 8 0營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基是用于測(cè)定化妝品菌落總數(shù)的培養(yǎng)基。
現(xiàn)在生產(chǎn)培養(yǎng)基的廠家很多，為了解不同廠家生產(chǎn)的卵磷脂、吐溫8 0營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 質(zhì)量，對(duì) 4種培養(yǎng)基進(jìn)行比較 ?，F(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下 。
一、材料與方法
1、實(shí)驗(yàn)菌株
大腸埃希菌 ( ATCC 25922 )，金黃色葡萄球菌 ( ATCC 6538) 。
2、培養(yǎng)基
卵磷脂、吐溫80營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基分別購(gòu)自杭州天和微生物試劑有限公司．北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司 ．廣東環(huán)凱微生物科技有限公司等3種干燥培養(yǎng)基，編號(hào)為1、2、3號(hào) ，干燥培養(yǎng)基按產(chǎn)品說明書配制，均在有效期內(nèi)使用。自配卵磷脂、吐溫8 0營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，由本實(shí)驗(yàn)室參照文獻(xiàn)方法配制。其蛋白胨采用日本進(jìn)口材料，自配培養(yǎng)基編號(hào)為4號(hào)，共4種卵磷脂、吐溫 8 0營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。
3、試劑
0.5％氯化三苯四氮唑 (TTC ) 121℃ 2 0min高壓滅菌，備用。
4、實(shí)驗(yàn)方法
⑴菌液的準(zhǔn)備
取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌分別接種營(yíng)養(yǎng)肉湯管。在37 ℃培 養(yǎng) 1 8 ～ 2 4 h。
⑵稀釋培養(yǎng)基并接種
將培養(yǎng)好的大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌兩種肉湯管用生理鹽水10倍稀釋 ，從10-1到l 0-7。選用平板上菌落數(shù)在5 0～1 0 0 c f u之間的稀釋度，然后取稀釋好菌懸液 1ml置入無菌平 皿，傾注加入0.5％TTC的卵磷脂、吐溫8 0營(yíng)養(yǎng)瓊脂，每個(gè)平板1 5-2 0ml ，每種培養(yǎng)基接種3個(gè)平板。待凝固后將平板翻轉(zhuǎn)置 3 7 ℃培養(yǎng) 4 8 h取出觀察結(jié)果．并以每種培養(yǎng)基的 3個(gè)平板菌落平均數(shù)為各檢測(cè)數(shù)進(jìn)行比較，試驗(yàn)重復(fù)5次。
⑶實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)量控制 用菌落計(jì)數(shù)方法，取大腸埃希菌肉湯培養(yǎng)管用生理鹽水10倍稀 釋，從 10-1到10-7，吸取10菌懸液1ml注入無菌平板。共接種3個(gè)平板，然后將已溶解的營(yíng)養(yǎng)瓊脂傾注平板 ?；靹颍讨?7℃培養(yǎng)48 h后作菌落計(jì)數(shù)，連續(xù)進(jìn)行10次。將所得結(jié)果標(biāo)入質(zhì)量控制圖。
二、結(jié) 果
1、4種培養(yǎng)基大腸埃希菌的計(jì)數(shù)比較
4種培養(yǎng)基對(duì)大腸埃希菌進(jìn)行5次菌落計(jì)數(shù)重復(fù)試驗(yàn)，結(jié)果顯示各種培養(yǎng)基的菌落大小與數(shù)量基本一致．差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 ( F=0.257，P>0.05) 。見表 1 。
表1：4種培養(yǎng)基大腸埃希菌生長(zhǎng)菌落數(shù)比較
2、4種培養(yǎng)基對(duì)金黃色葡萄球菌細(xì)菌總數(shù)計(jì)數(shù)
連續(xù)進(jìn)行5次實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示各種培養(yǎng)基的菌落大小與數(shù)量基本一致，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 ( F= 0.066，P>0.05 )： 見表 2 。
表2：4種培養(yǎng)基金黃色葡萄球菌生長(zhǎng)菌落數(shù)比較
3、實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)量控制
連續(xù) 1 0次菌落計(jì)數(shù)，測(cè)定值在 4.3×106—9.66×106之間，平均值為6.94×106cf u／ml 。s=1.74×106cf u／ml 。1 0次測(cè)定值均在`x±2 s范 圍 內(nèi) ，達(dá)到實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部控制標(biāo)準(zhǔn)要求。
三、討 論
實(shí)驗(yàn)表明，在4種不同廠家生產(chǎn)的卵磷脂、吐溫 80營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng)速度、菌落形態(tài)與數(shù)量無明顯差別 ，各種培養(yǎng)基的軟硬度、pH值等理化指標(biāo)符合質(zhì)量要求，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但在透明度上自配的卵磷脂、吐溫80營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基較其他3種干燥培養(yǎng)基清晰透明，而3種干燥培養(yǎng)基配制的平板較混濁可能是由于培養(yǎng)基的原材料不同的關(guān)系。自配培養(yǎng)基用的是日本進(jìn)口蛋白胨，其顏色偏淺 。蛋白胨是由蛋白質(zhì) (如酪蛋白、纖維蛋白)經(jīng)酶或酸堿分解而成。由于蛋白質(zhì)的來源和消化程度不同，因而制得的胨質(zhì)量相差很大，就是同一廠家不同批號(hào)的蛋白胨質(zhì)量也會(huì)有差異，所以是否這樣配制出來的培養(yǎng)基的透明度就有所不同。實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)量控制是保證實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確 性的必要基礎(chǔ)。為確保本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性與可靠性，我們對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行控制，繪制質(zhì)量控制圖 ，結(jié)果顯示，l 0次菌落總數(shù)測(cè)定值在4.3×106—9.66×106之間，均在允許誤差范圍，實(shí)驗(yàn)結(jié)果在`x±2 s之內(nèi) ，未發(fā)現(xiàn)失控現(xiàn)象，從實(shí)驗(yàn)穩(wěn)定、重復(fù)性好 ，表明本次培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)結(jié)果是可信的 。
近年，干燥培養(yǎng)基使用越來越廣泛，培養(yǎng)基的質(zhì)量關(guān)系到微生物實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作的成效 。因此 ，開展微生物培養(yǎng)基的質(zhì)控工作十分必要。目前，我國(guó)生產(chǎn)培養(yǎng)基的廠家很多，然而各廠家配制培養(yǎng)基的所采用配方有不同 ，有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)， 或是行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 。在制做方法上也各有異。如這次實(shí)驗(yàn)用的卵磷脂 、吐溫 8 0營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基里的吐溫8 0試劑 ，有些廠家 產(chǎn)品是在使用該培養(yǎng)基時(shí)才加吐溫8 0。還有4號(hào)瓊脂培養(yǎng)基，有些廠家生產(chǎn)干燥培養(yǎng)基是在制備4號(hào)瓊脂平板時(shí)加入亞碲酸鉀及慶大霉素，而有的廠家將亞碲酸鉀、慶大霉素已經(jīng)加進(jìn)干燥培養(yǎng)基里，兩種方法配制出來的4號(hào)瓊脂平板顏色就不一樣?，F(xiàn)在的商品培養(yǎng)基還存在一些問題，如培養(yǎng)基包裝不規(guī)范，沒有標(biāo)明生產(chǎn)日期及有效期限，包裝標(biāo)簽說明沒列出培養(yǎng)基的配方，還有的產(chǎn)品質(zhì)檢報(bào)告不規(guī)范等，干燥培養(yǎng)基的生產(chǎn)由于原料來源不同容易出現(xiàn)這樣或那樣的問題。因此，商品培養(yǎng)基的生產(chǎn)質(zhì)量要提高，不斷完善，要更加規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化 。據(jù)文獻(xiàn)介紹，實(shí)驗(yàn)室不得使用不符合要求的培養(yǎng)基。所以 ，在購(gòu)買干燥培養(yǎng)基時(shí) ，應(yīng)選擇技術(shù)力量強(qiáng)、性能穩(wěn)定、通過質(zhì)量管理體系認(rèn)證企業(yè)的產(chǎn)品，而且不要經(jīng)常更換廠家生產(chǎn)，以避免試驗(yàn)中出現(xiàn)使用不生產(chǎn)商的產(chǎn)品所造成的誤差，同時(shí)，無論自制還是商業(yè)提供培養(yǎng)基都需要按《 商業(yè)性微生物培養(yǎng)基質(zhì)量檢驗(yàn)規(guī)范》進(jìn)行質(zhì)量控制，使用高質(zhì)量的培養(yǎng)基，才能保證微生物檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確、公正、可靠 。