一、背景
大鼠S100B蛋白(S100B)ELISA試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠S100B蛋白（S-100B）水平。用純化的大鼠S100B蛋白（S-100B）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入S100B蛋白（S-100B），再與HRP標(biāo)記的S100B蛋白（S-100B）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的S100B蛋白（S-100B）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠S100B蛋白（S-100B）濃度。
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。
（一）標(biāo)本要求
1、標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2、不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
（二）注意事項(xiàng)
1、試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2、濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3、各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4、請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計(jì)算時(shí)請*后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6、底物請避光保存。
二、應(yīng)用
大鼠S100B蛋白(S100B)ELISA試劑盒可用于新生大鼠缺氧缺血性腦病血清S100B蛋白表達(dá)變化的實(shí)驗(yàn)研究：
建立新生SD大鼠缺氧缺血性腦損傷（hypoxic-ischemic brain damage，HIBD）模型，通過檢測不同時(shí)間點(diǎn)血清S100B蛋白水平，探討血清S100B蛋白的表達(dá)在新生SD大鼠缺氧缺血性腦病中的早期診斷價(jià)值，同時(shí)探索S100B蛋白在新生SD大鼠缺氧缺血性腦病后的出現(xiàn)時(shí)間、出現(xiàn)峰值時(shí)間及消失時(shí)間，從而進(jìn)一步為臨床新生兒缺氧缺血性腦病(HIE)患兒的早期診斷及確定HIE后S100B蛋白最佳采血時(shí)間提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
（一）方法
清潔級，封閉群，健康新生7日齡SD大鼠168只，雌雄不限，體重12～18g，隨機(jī)分為3組：假手術(shù)組，HIBD模型組，健康對照組，每組各56只，HIBD模型組采用改良Rice法制備HIBD模型。根據(jù)動物處死時(shí)間不同HIBD組又隨機(jī)分為7個(gè)亞組：0h組、6h組、12h組、24h組、48h組、72h及96h組，每亞組各8只。假手術(shù)組及正常對照組也在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)分為7組，每組8只。各組大鼠在相應(yīng)的時(shí)間點(diǎn)斷頭取血后處死，收集血液及腦組織標(biāo)本。
觀察各組運(yùn)動行為學(xué)變化、腦組織形態(tài)學(xué)變化及HE染色；雙抗夾心ELISA法檢測血中S100B蛋白的變化。
（二）結(jié)果
(1)7日齡SD大鼠在HIBD組建模后出現(xiàn)不同程度的行為異常，正常對照組與假手術(shù)組鼠未見異常行為。
(2)正常對照組、假手術(shù)組腦組織外觀正常，兩側(cè)對稱，無水腫、萎縮及壞死；HIBD模型組在建模后各時(shí)間點(diǎn)肉眼觀腦組織大體形態(tài)出現(xiàn)不同程度的異常改變。
(3)HE染色：正常對照組、假手術(shù)組腦組織和HIBD模型組在建模后0h腦細(xì)胞層次清楚、細(xì)胞形態(tài)正常；HIBD模型組在建模后6h出現(xiàn)不同程度的神經(jīng)細(xì)胞水腫、變性；12h、24h腦組織出現(xiàn)淤血水腫和血管充血；48h、72h神經(jīng)細(xì)胞出現(xiàn)不同程度的壞死，細(xì)胞核碎裂、溶解；96h細(xì)胞出現(xiàn)大片狀，細(xì)胞核碎裂、溶解。
(4)血清中S100B蛋白的表達(dá)：HIBD組0h時(shí)間點(diǎn)組與正常對照組、假手術(shù)組比較血清中S100B蛋白差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；HIBD組（0h、96h時(shí)間點(diǎn)組除外）、與正常對照組、假手術(shù)組比較各個(gè)時(shí)間點(diǎn)血清中S100B蛋白值顯著升高（P<0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；HIBD組48h時(shí)間點(diǎn)組分別與HIBD組6h、12h、24h、72h時(shí)間點(diǎn)組比較血清中S100B蛋白值顯著升高（P<0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；HIBD組6h、12h、24h、72h時(shí)間點(diǎn)組組間比較血清中S100B蛋白值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
中國微生物菌種查詢網(wǎng)隸屬于北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司，成立于二〇一四年十月份，是一家專業(yè)提供中國微生物菌種，標(biāo)準(zhǔn)菌種，質(zhì)控菌株,ATCC菌種,細(xì)胞系以及培養(yǎng)基等產(chǎn)品的查詢網(wǎng)站！自成立至今，已提供各類微生物菌種、細(xì)胞、培養(yǎng)基數(shù)量達(dá)四萬余份，接待咨詢客戶數(shù)量5萬余人次，成交合同數(shù)量2萬余份！是國內(nèi)微生物菌種及細(xì)胞信息Z全的網(wǎng)站！ 我們擁有自主研發(fā)能力，提供的ATCC菌種達(dá)15000余份,ATCC各類細(xì)胞系達(dá)3000余份,保藏中心涵蓋菌種資源更達(dá)數(shù)十萬余份！
除此之外，我們還擁有對菌種、細(xì)胞、培養(yǎng)基、配套試劑等產(chǎn)品需求者的極優(yōu)質(zhì)服務(wù)，對購買項(xiàng)目的前期資料提供,中期合同保證,后期貨物跟蹤到Z終售后的確保項(xiàng)目準(zhǔn)確到位，都有相關(guān)人士進(jìn)行維護(hù),確保您在中國微生物菌種查詢網(wǎng)中獲得Z優(yōu)質(zhì)服務(wù)！也正因?yàn)榇?，北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司與國內(nèi)外多家研制單位、生物制藥、第三方檢測機(jī)構(gòu)和科研院所院校、化工企業(yè)有著良好、長期和穩(wěn)定的合作關(guān)系！