中國微生物菌種查詢網(wǎng)：近年來，微生物引起的突發(fā)性公共衛(wèi)生事件屢有發(fā)生。疾病預(yù)防系統(tǒng)細(xì)菌檢驗(yàn)的正確性和可靠性，就直接影響著廣大人民群眾身體健康。為了給疾病預(yù)防和控制提供及時(shí)、準(zhǔn)確的檢驗(yàn)報(bào)告，室間質(zhì)評(píng)作為提高微生物實(shí)驗(yàn)室總體水平的一個(gè)重要手段越來越引起重視。我科從2001年起參加了陜西省臨床檢驗(yàn)中心每年兩次的微生物檢驗(yàn)室間質(zhì)量的評(píng)價(jià)工作，現(xiàn)將5年來的質(zhì)評(píng)結(jié)果總結(jié)分析如下。
一、材料與方法
1、質(zhì)控菌種
真空干燥菌種50株，由陜西省臨床檢驗(yàn)中心提供。
2、質(zhì)控目的
對(duì)未知菌種做出鑒定。
3、試劑
所用成品培養(yǎng)基購于上海市疾病預(yù)防控制中心，中國腹瀉病控制上海試劑供應(yīng)研究中心；微量生化管購于杭州微生物試劑廠；沙門菌診斷血清、志賀菌診斷血清、腸道致病性大腸埃希菌診斷血清、腸道侵襲性大腸埃希菌診斷血清、大腸菌O157診斷血清均購于衛(wèi)生部蘭州生物制品研究所，在有效期內(nèi)使用。
4、評(píng)價(jià)
（1）要求所報(bào)細(xì)菌必須到種或型，方可得分，即完全正確PT100％，否則PT為0；時(shí)間為10天，以郵戳為準(zhǔn)。
（2）每次得分（PT）計(jì)算：實(shí)驗(yàn)室回報(bào)正確細(xì)菌數(shù)/實(shí)際細(xì)菌數(shù)100％或者是各株細(xì)菌PT的平均值。
（3）評(píng)價(jià)分為：不及格PT<60％，及格PT≥60％，良好PT≥80％，優(yōu)秀PT≥90％。
二、檢驗(yàn)步驟
1、無菌操作開啟真空干燥管，加入無菌生理鹽水0.2ml，反復(fù)抽吸使成均勻混懸液。
2、分離培養(yǎng) 根據(jù)標(biāo)本來源不同，所涉及的菌屬不同，選擇相適應(yīng)的培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件進(jìn)行分離培養(yǎng)。
3、純培養(yǎng) 取平板上的單個(gè)菌落接種克氏雙糖斜面37℃培養(yǎng)24h。做氧化酶試驗(yàn)，葡萄糖氧化發(fā)酵試驗(yàn)。根據(jù)初步生化選擇鑒定方向。
4、染色鏡檢 進(jìn)行革蘭染色。
5、生化試驗(yàn) 對(duì)疑似菌做系統(tǒng)生化試驗(yàn)。
6、血清學(xué)試驗(yàn) 對(duì)疑似菌做血清凝集試驗(yàn)。
7、結(jié)果判定 綜合分析生長(zhǎng)情況，生化特征，血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果，作出鑒定。
三、結(jié)果
以陜西省臨床檢驗(yàn)中心返回結(jié)果及得分為準(zhǔn)。我室鑒定結(jié)果及全省的平均水平見表1、表2；50株質(zhì)控菌包括20個(gè)菌屬見表3。表1 2001～2005年微生物室間質(zhì)控菌株鑒定結(jié)果 表2 全省質(zhì)控菌株鑒定平均PT（％）與我室PT（％）比較表3 50株質(zhì)控菌株的分類從5年的微生物室間質(zhì)控菌株鑒定結(jié)果看：我室細(xì)菌鑒定的正確率逐步提高，鑒定結(jié)果均高于全省的平均值。在2001年菌株鑒定中，有2株鑒定錯(cuò)誤：如將鮑蔓不動(dòng)桿菌鑒定為洛非不動(dòng)桿菌；將腸出血性大腸埃希菌鑒定為普通大腸埃希菌。原因：對(duì)常見熟悉細(xì)菌的鑒定正確率高，對(duì)不常見的細(xì)菌因準(zhǔn)備工作不充分，生化試驗(yàn)的項(xiàng)目不全，導(dǎo)致非發(fā)酵菌的判斷錯(cuò)誤，使鮑蔓不動(dòng)桿菌錯(cuò)判為洛非不動(dòng)桿菌；腸出血性大腸埃希菌由于與O157診斷血清不發(fā)生凝集且山梨醇(+)、枸櫞酸鹽(-)、尿素(-)與正常不符，致鑒定錯(cuò)誤。
四、討論
2001～2005年鑒定質(zhì)控菌株共50株，涉及近20個(gè)菌屬。旨在增加試驗(yàn)的機(jī)會(huì)，鍛煉操作能力，積累工作經(jīng)驗(yàn)，提高細(xì)菌鑒定工作的準(zhǔn)確性和工作效率，有助于及時(shí)發(fā)現(xiàn)細(xì)菌鑒定中的問題并及時(shí)加以改進(jìn)。無論室間質(zhì)控，室內(nèi)質(zhì)控，還是日常的檢驗(yàn)工作，都應(yīng)從多方面做充分的準(zhǔn)備，在多種樣品多種細(xì)菌同時(shí)存在的情況下，要求檢驗(yàn)人員鑒定思路清晰，善于抓住被檢菌的生長(zhǎng)特點(diǎn)、溶血能力、染色特性、動(dòng)力等，選擇相應(yīng)的檢驗(yàn)程序，這樣可以避免試驗(yàn)的盲目性，節(jié)約試驗(yàn)時(shí)間。筆者有以下體會(huì)：
接到室間細(xì)菌質(zhì)控樣本后，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)，與常規(guī)工作放在一起，由常規(guī)工作人員參加操作，使用與常規(guī)工作同樣的方法，同樣的試劑，同樣的步驟進(jìn)行操作。既可以檢查自己的實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)控的質(zhì)量，同時(shí)還了解自己試驗(yàn)室與其他實(shí)驗(yàn)室之間的差異，檢驗(yàn)細(xì)菌鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確性。
在沒有全自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀等先進(jìn)設(shè)備情況下，對(duì)于細(xì)菌鑒定要求檢驗(yàn)工作者有較高的思想素質(zhì)和業(yè)務(wù)水平，需要積累豐富的工作經(jīng)驗(yàn)。在球菌鑒定中，可通過血平板上菌落溶血特點(diǎn)，革蘭染色，顯微鏡觀察菌體形態(tài)作初步判定，再做系統(tǒng)生化進(jìn)行鑒定；對(duì)革蘭陰性桿菌，為了迅速，準(zhǔn)確鑒定，首先要做葡萄糖氧化發(fā)酵試驗(yàn)和氧化酶試驗(yàn)進(jìn)行初步鑒定，以確定其為腸桿菌科細(xì)菌，非發(fā)酵菌及弧菌科細(xì)菌；然后再按各自的鑒定程序進(jìn)行生化鑒定，見表4。表4 腸桿菌科細(xì)菌與其他革蘭陰性菌的鑒別在確定被檢菌為腸桿菌科細(xì)菌之后，可根據(jù)苯丙氨酸酶試驗(yàn)和葡萄糖酸鹽試驗(yàn)進(jìn)行初步分屬，把常見的腸桿菌科細(xì)菌分為三大類，十二個(gè)屬，然后根據(jù)常見菌屬的生化特征作進(jìn)一步鑒定，見表5。沙門菌、志賀菌、大腸埃希菌等還應(yīng)與相應(yīng)的診斷血清作血清學(xué)凝集試驗(yàn)，加以確定，在實(shí)際工作中只有血清反應(yīng)與生化試驗(yàn)符合時(shí)，才具有診斷意義。表5 腸桿菌科細(xì)菌的初步分屬真空干燥菌種初步分離培養(yǎng)后染色形態(tài)，有些生化反應(yīng)可出現(xiàn)假陽性或假陰性結(jié)果；如：本室在鑒定腸出血性大腸埃希菌時(shí)，山梨醇(+)、枸櫞酸鹽(-)、尿素(-)與正常結(jié)果不符，因此,檢驗(yàn)工作者工作時(shí),應(yīng)認(rèn)真仔細(xì)、一絲不茍，以免發(fā)生判斷錯(cuò)誤，有些生化反應(yīng)經(jīng)傳代后可恢復(fù)正常，在實(shí)際工作中應(yīng)加以注意。
細(xì)菌的檢驗(yàn)程序必須符合國家標(biāo)準(zhǔn)和專業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，只有標(biāo)準(zhǔn)化，才能規(guī)范化；只有規(guī)范化，才能程序化。選擇合適的程序，才能使細(xì)菌的分離鑒定少走彎路，提高細(xì)菌鑒定的工作效率。5年的質(zhì)控參與對(duì)我室的細(xì)菌鑒定工作有很大的提高，同時(shí)加強(qiáng)了對(duì)病原細(xì)菌引起的突發(fā)性公共衛(wèi)生事件的應(yīng)對(duì)能力，使我們的工作更好地為廣大人民群眾的健康服務(wù)，為疾病預(yù)防控制工作服務(wù)。以上是筆者在質(zhì)控和實(shí)際工作中的一點(diǎn)體會(huì)，供同行們?cè)趯?shí)際工作中參考。