一、目的
1、觀測氧氣、溫度、紫外線對微生物生長的影響
2、認識細菌芽孢對熱、紫外線的抗力
二、原理
環(huán)境因素包括物理因素、化學(xué)因素和生物因素，不良的環(huán)境條件使微生物的生長受到抑制，甚至導(dǎo)致菌體的死亡。但是某些微生物產(chǎn)生的芽孢，對惡劣的環(huán)境條件有較強的抵抗能力。我們可以通過控制環(huán)境條件，使有害微生物的生長繁殖受到抑制，甚至被殺死；而對有益微生物，通過調(diào)節(jié)理化因素，使其得到良好的生長繁殖或產(chǎn)生有經(jīng)濟價值的代謝產(chǎn)物。
根據(jù)微生物對氧氣的需求，可把微生物分為好氧菌、厭氧菌和兼性好氧菌。在鑒定細菌時，常以它們的好氧性作為指標(biāo)。
溫度是影響微生物生長的重要因素之一。根據(jù)微生物生長的最適溫度范圍，可分為高溫菌、中溫菌和低溫菌，自然界中絕大部分微生物屬于中溫菌。
紫外線主要作用于細胞內(nèi)的DNA，輕則使微生物發(fā)生突變，重則造成微生物死亡。紫外線照射的劑量與所用紫外光燈的功率(瓦數(shù))、照射距離和照射時間有關(guān)。紫外線透過物質(zhì)的能力弱，一層黑紙足以擋住紫外線的通過。
三、材料
1、菌種
大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、粘質(zhì)沙雷氏菌。
2、培養(yǎng)基
肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基、麥芽汁葡萄糖培養(yǎng)基、察氏培養(yǎng)基。
3、其他物品
培養(yǎng)皿、無菌圓濾紙片、鑷子、無菌水、無菌滴管、水浴鍋、紫外線燈、黑紙、試管、接種針、溫箱、刮鏟、吸管、調(diào)溫搖床、分光光度計。
四、物理因素對微生物生長的影響
1、氧氣對微生物生長的影響
⑴流程
半固體培養(yǎng)基→接種→培養(yǎng)→觀察比較→記錄結(jié)果
⑵步驟
①制備試管培養(yǎng)基
依據(jù)培養(yǎng)基配方制作肉膏蛋白胨半固體培養(yǎng)基，滅菌備用。
②接種與培養(yǎng)
取上述試管7支，用穿刺接種法分別接種枯草芽孢桿菌、大腸桿菌和丙酮—丁醇梭菌，每種菌接種2支培養(yǎng)基試管，剩余一支作為空白對照。注意：穿刺接種到上述培養(yǎng)基中時，必須穿刺到管底。在37℃恒溫箱中培養(yǎng)48h。
③觀察結(jié)果
取出試驗樣品，觀察各菌株在培養(yǎng)基中生長的部位。
2、溫度對M的影響
⑴流程
配培養(yǎng)液→選擇溫度→接種→培養(yǎng)→觀察比較→記錄結(jié)果
⑵配制培養(yǎng)基
配制肉膏蛋白胨培養(yǎng)液試管（標(biāo)記A）和豆芽汁葡萄糖培養(yǎng)液試管(標(biāo)記B)，每管裝5m1培養(yǎng)液，滅菌備用。
⑶選擇試驗溫度
取16支A培養(yǎng)液試管和8支B培養(yǎng)液試管，分別標(biāo)明20℃、28℃、37℃和45℃四種溫度，每種溫度A培養(yǎng)液4管，B培養(yǎng)液2管。
⑷接種與培養(yǎng)
A試管分別接入培養(yǎng)18—20h的大腸桿菌、枯草芽孢桿菌菌液0.1m1，混勻；同樣B試管接入培養(yǎng)18—20h的釀酒酵母菌液0.1m1，混勻；每個處理設(shè)2個重復(fù)，并進行標(biāo)記。放在標(biāo)記溫度下振蕩培養(yǎng)24小時。
⑸觀察結(jié)果
根據(jù)菌液的混濁度判斷大腸桿菌、枯草芽孢桿菌和釀酒酵母菌生長繁殖的最適溫度。
3、微生物對高溫的抵抗力
⑴流程
培養(yǎng)液→接種→高溫→培養(yǎng)→觀察比較→記錄結(jié)果
⑵步驟
①選取培養(yǎng)基
取8支A培養(yǎng)液試管，按順序從1到8編號。
②接種
其中4支(例如1、3、5、7)培養(yǎng)液試管中各接入培養(yǎng)48h的大腸桿菌的菌懸液0.1m1，其余4支(2、4、6、8) 培養(yǎng)液試管中各接入培養(yǎng)48h的枯草芽孢桿菌的菌懸液0.1m1，混勻。
③高溫水浴
將8支已接種的培養(yǎng)液試管同時放入100℃水浴中，10min后取出1至4號管，再過10min后，取出5至8號管。各管取出后立即用冷水或冷卻。
④培養(yǎng)
將各管置于其最適溫度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。
⑤觀察結(jié)果
依據(jù)菌株生長狀況記錄結(jié)果。以“一”表示不生長，“十’表示生長，并以“十”，“十十”，“十十十”表示不同生長量。
4、紫外線對微生物的影響
⑴流程
倒平板→涂布接種→紫外線處理→培養(yǎng)→觀察比較→記錄結(jié)果
⑵步驟
①標(biāo)記培養(yǎng)基
取肉膏蛋白胨培養(yǎng)基平板3個，分別標(biāo)明大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌等試驗菌的名稱。
②接種
分別用無菌吸管取培養(yǎng)18—20h的大腸桿菌、枯草芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌菌液0.1m1(或2滴)，加在相應(yīng)的平板上，再用無菌刮鏟涂布均勻。
③紫外線處理
打開培養(yǎng)皿蓋，用無菌黑紙遮蓋部分平板，置于預(yù)熱10一15min后的紫外燈下，紫外線照射20 min左右，取去黑紙，蓋上皿蓋。
④培養(yǎng)
在37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。
⑤觀察結(jié)果
觀察菌株分布狀況，比較并記錄三種菌對紫外線的抵抗能力。
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