醫(yī)用一次性防護(hù)服輻照滅菌用生物指示菌 短小芽孢桿菌Bacillus pumilus
中國(guó)微生物菌種查詢網(wǎng) / 2020-05-11 08:09:23
醫(yī)用一次性防護(hù)服輻照滅菌用生物指示菌 短小芽孢桿菌Bacillus pumilus
為保障疫情防控期間緊急醫(yī)用一次性防護(hù)服的供給，國(guó)務(wù)院應(yīng)對(duì)新型冠狀病毒感染的肺炎疫情聯(lián)防聯(lián)控機(jī)制醫(yī)療物資保障組于2020年2月8日發(fā)出了“關(guān)于疫情期間執(zhí)行《醫(yī)用一次性防護(hù)服輻照滅菌應(yīng)急規(guī)范（臨時(shí)）》的通知”，要求各地可采用輻照（鈷60或電子加速器）方式對(duì)醫(yī)用防護(hù)服進(jìn)行滅菌。實(shí)施輻照時(shí)，按照產(chǎn)品生產(chǎn)廠家要求，在產(chǎn)品箱中布放快速檢測(cè)生物指示物，輻照結(jié)束后，快速檢測(cè)生物指示物為陰性結(jié)果時(shí)符合產(chǎn)品放行要求。那么什么是生物指示物？輻照滅菌用的生物指示物應(yīng)采用什么菌種、又具有什么特點(diǎn)呢？小編帶您來(lái)了解一下。
生物指示物定義在不同標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范中不盡相同：《醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌 輻射 第1部分： 醫(yī)療器械滅菌過(guò)程的開發(fā)、確認(rèn)和常規(guī)控制要求》（GB 18280.1-2015）中是指“包含對(duì)規(guī)定的滅菌過(guò)程有確定抗力的活微生物的測(cè)試系統(tǒng)”；《醫(yī)療衛(wèi)生用品輻射滅菌消毒質(zhì)量控制》（GB 16383-2014）中是指“對(duì)特定滅菌或消毒程序有確定的抗力，可供消毒滅菌效果監(jiān)測(cè)使用的微生物檢驗(yàn)器材。”《消毒技術(shù)規(guī)范》（2002年版）中是指“將適當(dāng)載體染以一定量的特定微生物，用于指示消毒或滅菌效果的制品”。
從以上定義可以看出生物指示物的要素為含有一定量的特定微生物，有確定抗力（以D值或D10值*表示），特定微生物的選擇至關(guān)重要。依據(jù)《中國(guó)藥典》（2015年版）、《消毒技術(shù)規(guī)范》和《一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（GB 15979-2002），電離輻射滅菌或消毒所采用的生物指示菌為短小芽孢桿菌Bacillus pumilus E601（ATCC 27142）。
依據(jù)ATCC網(wǎng)站公開信息，短小芽孢桿菌E601主要用于電離輻射滅菌控制和無(wú)菌保證。1956年Pepper RE等人采用陰極射線對(duì)18株芽孢桿菌屬Bacillus和7株梭菌屬Clostridium的芽孢抗輻射性能進(jìn)行了研究，結(jié)果表明短小芽孢桿菌E601具有比較強(qiáng)的抗性。該菌株具有以下生物學(xué)特性：
革蘭氏陽(yáng)性，菌體呈桿狀，成對(duì)出現(xiàn)，大小0.6-0.7×2.0-3.0μm，可形成芽孢，芽孢圓柱形或橢圓形，膨大，中生或端生，見圖1。菌落白色或乳白色，圓形，表面濕潤(rùn)，光滑，有半透明和不透明兩種形態(tài)，邊緣整齊，可起皺、邊緣不規(guī)則，見圖2。好氧生長(zhǎng)，有運(yùn)動(dòng)性，最低生長(zhǎng)溫度5～15°C，最高生長(zhǎng)溫度40～50°C。生長(zhǎng)pH范圍 6.0～9.5。10％NaCl條件下可以生長(zhǎng)。過(guò)氧化氫酶陽(yáng)性。
圖1 短小芽孢桿菌B. pumilus顯微形態(tài)** 圖2 短小芽孢桿菌B. pumilus菌落形態(tài)**
電離輻射生物指示物采用短小芽孢桿菌B. pumilus芽孢制備而成。芽孢又稱內(nèi)生孢子，是產(chǎn)芽孢細(xì)菌在營(yíng)養(yǎng)缺乏條件下在胞內(nèi)形成的圓形或橢圓形的休眠體，因含水量極低、抗逆性強(qiáng)，被廣泛用于高溫、紫外線、電離輻射等多種滅菌方法的監(jiān)測(cè)用指示物。
研究顯示，短小芽孢桿菌B. pumilus E601比蠟樣芽孢桿菌B. cereus、枯草芽孢桿菌B. subtillu及生孢梭菌Clostridium sporogenes等菌種的芽孢具有更高的抗輻射性能，其芽孢濃度在106CFU/個(gè)時(shí)，隨附著載體和介質(zhì)不同，其D值在1.20～2.53kGy之間變化，采用濾紙片為載體、塑料袋包裝時(shí)，其對(duì)鈷-60照射的D值一般為1.7kGy，對(duì)電子直線加速器照射的 D值為1.85kGy，符合《消毒技術(shù)規(guī)范》和《一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（GB 15979-2002）中對(duì)電離輻射滅菌或消毒生物指示物要求。
在使用生物指示物進(jìn)行消毒或滅菌效果監(jiān)測(cè)時(shí)，依據(jù)《醫(yī)療衛(wèi)生用品輻射滅菌消毒質(zhì)量控制》（GB 16383-2014）要求，于最小劑量處，每次至少布放10片生物指示物，《消毒技術(shù)規(guī)范》要求每次測(cè)試至少選5箱，每箱產(chǎn)品布放3片生物指示物，將待檢箱置最小劑量處。
滅菌結(jié)束后，取出指示物接種營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)液作定性檢測(cè)或接種營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基作定量檢測(cè)，同時(shí)將未處理的生物指示物作為陽(yáng)性對(duì)照相同接種，兩者均置35℃±2℃培養(yǎng)。陽(yáng)性對(duì)照應(yīng)在24h內(nèi)有菌生長(zhǎng)。定性培養(yǎng)樣品如連續(xù)觀察7d全部無(wú)菌生長(zhǎng)，可報(bào)告生物指示物培養(yǎng)陰性，滅菌合格。定量培養(yǎng)樣品與陽(yáng)性對(duì)照相比殺滅對(duì)數(shù)值***達(dá)到3.0也可報(bào)告滅菌合格。根據(jù)產(chǎn)品輻照滅菌的無(wú)菌保證水平（SAL）選擇生物指示物的定性或定量結(jié)果評(píng)價(jià)，如果產(chǎn)品SAL要求≤10-6，則應(yīng)選擇定性培養(yǎng)，如果產(chǎn)品SAL要求≤10-3，則應(yīng)選擇定量培養(yǎng)。
注：
* ：D值或D10值：在規(guī)定條件下，殺滅90%微生物數(shù)量所需的時(shí)間(min)或劑量。
**：圖1和圖2摘自《Bergey's Manual of Systematic Bacteriology》 (第二版，第3卷)
***：殺滅對(duì)數(shù)值：當(dāng)微生物數(shù)量以對(duì)數(shù)表示時(shí)，指消毒前后微生物減少的對(duì)數(shù)值。
相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)法規(guī)及參考文獻(xiàn)：
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